Анализ кала на наличие хеликобактер. Как сдавать анализ кала на хеликобактер пилори. Рекомендации доктора Анализ пцр на хеликобактер пилори

После заражения микроб появляется во многих средах организма. Так что становится возможным анализ на хеликобактер пилори по биохимии крови, слюне, калу и так далее. Вопрос об этом решается по наличию соответствующих возможностей у местной лаборатории. Анализ крови на проводится с целью выявить наличие антител IgG и некоторых других комплексов, формируемых под действием антигенов (CagA и другие). Расшифровка анализа ведётся по таблицам. Так норма в крови этих веществ известна.

Золотым методом у медиков считается вовсе не анализ крови на хеликобактер пилори. Рекомендуется сделать биопсию с последующим посевом образца на питательные среды. Это как результативный анализ хеликобактер, так и путь для определения чувствительности культуры к лекарственным препаратам.

В сыворотке быстро формируются антитела к хеликобактер пилори. Картина характеризуется количественным изменением интелейкинов:

Повышение числа IL-6, 8 и 10.
Снижение количества IL-2.

Однако в исследованиях, проведённых на подростках, обнаружено несоответствие картин у детей и взрослых. С 14 до 17 лет у людей не зафиксировано количественного изменения цитокинов. Подростки сдали кровь на хеликобактер, и не выявилось никаких различий по содержанию интерлейкинов, факторов некроза и интерферонов.

Что такое цитокины

Цитокины пока ещё недостаточно изучены, так что диагностика в этом плане носит скорее предположительный характер. О чем и было сказано выше. Медики пока ещё выясняют соотношения между понятиями хеликобактер пилори, анализ крови, норма и цитокины.

Описываемые структуры представляют собой белковые комплексы, формируемые как ответ иммунной системы. По конфигурации цитокины близки к гормонам, а функции их пока что не изучены. Вот некоторые предположения на этот счёт:

Контроль за производством клеток крови и их дифференцированием.
Балансировка иммунной системы.
Регулировка процессов воспаления.
Поддержание нормального давления крови и её свёртывания.

Цитокины сегодня постоянно пополняются новыми представителями класса. Медики делят их на классы следующим образом:

Интерлейкины.
Интерфероны.
Хемокины.
Монокины.
Лимфокины.
Колониестимулирующие факторы.

Когда велось исследование новой тогда ещё инфекции хеликобактер пилори, медики обнаружили в цифрах повышенный фон IL-1 бета и IL-6 (на слизистой, а не в крови). Со временем стало ясно, что неадекватные реакции иммунной системы, которая отказывается бороться с инфекцией и постепенно переключается на аутоиммунные реакции, обусловлены формируемыми цитокинами. Указанные вещества проникали в цитоплазму клеток и межклеточное вещество.

Вот почему сегодня положительный анализ крови расшифровывается, как источник проблем в области сердечно-сосудистой системы, кожных заболеваний, анемии и других. При в первую очередь фиксируется снижение уровня факторов некроза опухоли альфа, IL-8 и IL-1 бета.

Не все штаммы провоцируют подобные изменения, а те, которые содержат антиген CagA. IL-8 – провокатор воспаления в организме.

Антитела

Когда медики столкнулись с проблемой замены биопсии ввиду сложности проведения процедуры, то выдумали сонм иных методик. Исследования на антитела в крови относятся к этому разряду. Анализ считается неинвазивным, хотя проводится при помощи шприца. Первоначально исследование на антитела напоминало то, что проводится для кампилобактера. Посредством перекрёстной реакции антигенов медики решали вопрос о присутствии их в сыворотке крови.

Что касается исследований на специфические факторы, например, CagA, то было вынесено решение о нецелесообразности такого подхода из-за плохой чувствительности.

Наличие IgG не указывает на присутствие инфекции. Удаётся обнаружить при анализе этот фрагмент в течение продолжительного времени. Из-за резкого снижения носителей инфекции в развитых странах удаётся определить наличие IgG у тех, кто давно уже получил негативный статус присутствия микроба.

Постепенно титры антител падают. Требуется парный анализ (до и после лечения), чтобы понять, каков диагноз. Потому единые цифры не удаётся выявить для отдельно взятого пациента. Снижение титров длится десятилетиями. Сегодня медики предлагают оценивать успех лечения по 50% снижению за 6 месяцев. Этот признак отличается повышенной чувствительностью (97%) и специфичностью (95%).

Сегодня тесты на иммуноглобулины IgA и IgM не одобряются в развитых странах. Поскольку показатели достоверности желают лучшего.

Прочие маркеры присутствия инфекции

Помимо морфологических признаков, регистрируемых инструментальными методиками (гастрит, язва и так далее), выделяют клинические признаки, как например, сильный голод. Это обусловлено биохимическим составом крови – повышенным уровнем гастрина. Слабоположительный прирост уровня пепсиногена рассматривается как фактор риска развития язвы. Однако этот фактор указывает не на формирование заболевания, а выявляет в крови маркер присутствия хеликобактера.

Сначала этот признак отнесли к генетически заложенному в организме человека. Поскольку то же характерно при аутоиммунном гастрите. Однако повторный анализ ситуации показал, что бактерия – причина. Так что медики уровень пепсиногена и гастрина в крови считают весомым доводом в пользу выставляемого диагноза. Так при росте соотношения пепсиногенов I и II на 25% пора уже присмотреться. Фурута сообщает о специфичности этой методики в 90% случаев и чувствительности – 95%.

Гипотеза проверялась путём оценки титров IgG после лечения инфекции. Через 2 недели после излечения медики зафиксировали снижение гастрина. Однако, чтобы сдать тест крови по этой методики, придётся выполнить его дважды с интервалом 6-12 месяцев.

Анализ результата

Результат оценивается, например, по той сумме, которую дают антитела к хеликобактер (иммуноглобулины А, М и G):

0,8 – суммарные показатели указывают на негативный ответ о наличии диагноза.
0,8 – 1,1 – требуется дополнительное исследование.
Свыше 1,1 – значит, что в желудке локализована инфекция.

Исследования кала

Бактерия обнаруживается в испражнениях, так что анализ кала на хеликобактер – неотъемлемое исследования на бактерию. Однако стул анализируется на антиген. В США (штат Цинциннати) уже разработан комплект количественной оценки кала на наличие нужных молекул.

В основу заложен иммуноферментный анализ, чувствительность которого к антигену составляет 185 нг/мл. Подготовка сильно напоминает то, о чем было написано выше в отношении проб крови. На антитела из состава оборудования осаждаются антигены (посредством белковых механизмов идентификации). Однако это не даёт представления о том, как лечить инфекцию. То, что антиген в кале, показывает наличие бактерии в желудке.

Поликлональные антитела, связанные с пероксидазой, и пробу инкубируют в течение 1 часа. Затем материал наносится на лунки и выдерживается 10 минут. Связанный фермент изменяет цвет, регистрируемый спектрофотометрическими методами. Для фиксации результата (чтобы остановить процесс) добавляют стоп-раствор.

Результат по достоверности сравним с гистологическим исследованием биопсии. Медики даже не берутся сказать, какой самый точный. Однако ошибки (5%) все-таки встречаются. С биопсией это случается реже.

Медики обратили внимание на зависимость качества ингредиентов, поставляемых вместе с набором, а также значение профессионализма сотрудников лаборатории. Реактивы получают из подопытных кроликов, и стандартизация сильно осложнена из-за недостатка знаний о нужных технологиях.

Исследование кала по результативности сравнивается с тестом дыхательным. Этим путём проводится определение достоверности результатов, полученных по крови.

Методики оценки присутствия инфекции

Помимо того, как сдаётся анализ, как берут пробу, выделяют пути оценки нужных параметров. Выше приведены сведения о биохимических и иммуноферментных разновидностях. Но точный – ПЦР. Это клонирование участков ДНК при помощи специальных реакций, что позволяет обнаружить бактерию.

Этот метод считается сегодня перспективным. В особенности, когда речь идёт о дизентерии. ПЦР на определение микроба в кале затруднено, так как наличие специфических компонентов препятствует протеканию реакции. Это мешает правильно понять результаты. К тому же, некоторые участки ДНК схожи с теми, что выявлены у других бактерий (которых в испражнениях много). Поэтому тест в этом случае не считается оптимальным, а стоит дороже, нежели дыхательный.

Однако ПЦР позволяет быстрее обнаруживать мутации ДНК, обусловливающие резистентность класса к тем или иным медицинским препаратам. Так что достоверность отходит на второй план перед перспективами, открывающимися исследователям (в научном, а не клиническом смысле).

Общие инструкции по выбору

Из сказанного понятно, что одно обследование дополняет другое. Они не альтернатива друг другу. Проверяйтесь по той и другой методике, чтобы правильно диагностировать заболевание. Этим методы дополняют собой .

По большей части оба применяются уже после лечения для оценки успешности эрадикации. С целью определения титра, где повышен эффект присутствия антител. Если речь идёт о диагностике, то сдаётся в лаборатории кал. Поскольку так обнаруживается присутствие микроба в ЖКТ. Что касается крови, то наилучшие результаты получаются при двух разнесённых по времени пробах. Что далеко не во всех случаях уместно.

Чаще делается всё-таки дыхательный тест, который люди иной раз сдают в домашних условиях. А кровь при необходимости берётся медиками в клинике. Проверенным случаем считается тот, когда при ФГДС проводится взятие биопсии с последующим высеванием на питательную среду. Лучше пока что ничего не придумано.

А рассматриваемые виды – вспомогательные методики. Если речь идёт об экспресс-анализе, исследование кала помогает уточнить диагноз. Если о лечении – состояние крови характеризует результативность эрадикации. Желающим определить наличие микроба лучше начинать с дыхательного теста, как безобидного и простого в реализации.

[09-053 ] Helicobacter pylori, ДНК [реал-тайм ПЦР]

1025 руб.

Заказать

Выявление Helicobacter pylori (H. pylori), в ходе которого с помощью метода полимеразной цепной реакции в реальном времени (РТ-ПЦР) определяется генетический материал (ДНК) микроорганизма в образце биоматериала.

Синонимы русские

Хеликобактер [полимеразная цепная реакция в режиме реального времени].

Синонимы английские

H. pylori, Helicobacter pyloridis, DNA .

Метод исследования

Полимеразная цепная реакция в режиме реального времени.

Какой биоматериал можно использовать для исследования?

Биоптат, кал.

Общая информация об исследовании

H. pylori – это грамотрицательная подвижная бактерия, устойчивая к воздействию соляной кислоты и способная колонизировать слизистую оболочку желудка и двенадцатиперстной кишки. Как правило, первичное инфицирование происходит в детстве и протекает бессимптомно, но у некоторых людей с течением времени приводит к развитию серьезных заболеваний. H. pylori обнаруживается в подавляющем большинстве случаев гастрита и язвенной болезни и, кроме того, многократно увеличивает риск развития аденокарциномы и В-клеточной лимфомы желудка. Современная диагностика этих заболеваний невозможна без точной и быстрой идентификации H. pylori.

H. pylori может быть выявлена с помощью нескольких методов. В настоящее время доступны неинвазивные методы диагностики, обладающие преимуществом простоты и безопасности взятия образца для исследования (исследование кала), что имеет особое значение при обследовании пожилых людей, детей, а также в условиях амбулатории.

Helicobacter очень чувствительна к воздействию желчных кислот и пониженного содержания кислорода, поэтому при пассаже химуса через двенадцатиперстную и толстую кишку количество бактерий значительно снижается. Кроме того, активные спиралевидные формы бактерии претерпевают морфологические изменения, обеспечивающие большую устойчивость в неблагоприятных условиях. Результатом этого становится низкая концентрация микроорганизмов и преобладание кокковых форм в кале, что следует учитывать при выборе лабораторного метода исследования этого биоматериала. Среди многих неинвазивных методов особое место занимает исследование с помощью полимеразной цепной реакции в режиме реального времени.

Полимеразная цепная реакция в реальном времени (РТ-ПЦР) – это метод молекулярной диагностики, позволяющий выявлять в биологическом материале (например, в кале) фрагменты генетического материала (ДНК) возбудителя инфекции. РТ-ПЦР характеризуется очень высокой чувствительностью (93-95 %), что является преимуществом при анализе кала. В отличие от бактериологического посева, это исследование позволяет выявлять как спиралевидные, так и кокковые (некультивируемые) формы H. pylori. Из-за того что в реакции выявляется ДНК микроорганизма, исследование не применяется для дифференциальной диагностики текущей инфекции или инфекции в анамнезе – результат анализа будет положительным еще некоторое время после полной эрадикации H. pylori, что обусловлено выявлением фрагментов разрушенных ДНК микроорганизма.

На слизистой оболочке желудка могут также присутствовать другие представители рода Helicobacter (H. suis, H. baculiformis). Несмотря на то что их значение в развитии заболеваний ЖКТ еще до конца не установлено, они играют определенную роль при идентификации H. pylori. Так, например, лабораторные исследования, основанные на выявлении общего для всех видов Helicobacter антигена, будут характеризоваться большим числом ложноположительных результатов исследования на H. pylori за счет выявления других видов (как в случае с ELISA). Это практически исключено в исследовании с помощью РТ-ПЦР, так как реакция основана на выявлении специфического для H. pylori фрагмента ДНК.

Диагностика хеликобактериоза у детей представляет определенные трудности. Это связано с невыполнением ребенком дыхательного маневра при использовании уреазного дыхательного теста, а также необходимостью наркоза при использовании инвазивных методов. Исследование кала с помощью РТ-ПЦР является хорошей альтернативой этим методам и поэтому может быть с успехом применено в педиатрической практике.

Высокое содержание неорганических солей (фосфатов, кальция), ферментов ЖКТ, полисахаридов, желчных кислот и солей, растительных волокон, слизи и других компонентов кала может ингибировать РТ-ПЦР, поэтому подготовка к тесту требует должного внимания со стороны пациента и врача. Интерпретация результата анализа проводится с учетом дополнительных лабораторных и инструментальных данных.

Для чего используется исследование?

Для диагностики заболеваний, вызванных H. pylori:

атрофического или антрального гастрита;
язвы желудка и двенадцатиперстной кишки.

Когда назначается исследование?

При подозрении на гастрит или язвенную болезнь у детей и пожилых людей.
При невозможности использования инвазивных методов идентификации H. pylori у пациентов любого возраста.

Что означают результаты?

Референсные значения: отрицательно.

Положительный результат:

текущая H. pylori-инфекция;
H. pylori-инфекция в анамнезе.

Отрицательный результат:

отсутствие H. pylori-инфекции.

Что может влиять на результат?

Присутствие в образце кала крови, желчи, избытка неорганических солей и других компонентов может приводить к получению ложноотрицательного результата.
Лечение препаратами тетрациклина, пенициллина (аминопенициллины), макролидами (кларитромицин, азитромицин) и метронидазолом может приводить к получению ложноотрицательного результата.

Важные замечания

Анализ кала на хеликобактер пилори – это достоверное доказательство наличия в организме человека бактерии, вызывающей язвенную и множество других болезней пищеварительного тракта человека. Такой анализ является прямым доказательством, если обнаруживается либо сам хеликобактер, либо его ДНК. Достоверность анализа самая высокая изо всех известных.

От правильности подготовки и сбора материала зависит результат. Присутствия человека не требуется, достаточно вовремя доставить правильно собранный материал.

Подготовка к сдаче анализа

При подготовке нужно неукоснительно соблюдать такие правила:

Для подготовки достаточно 3-х дней. В это время желательно отказаться от всех лекарств (если сделать этого нельзя, сообщить врачу названия и дозировку). Нужно сократить употребление рыбы и мяса, готовить их на пару или варить. Лучшая еда на это время – каши и кисломолочные продукты, овощные и фруктовые пюре, слабые супы, нейтральные натуральные соки (яблочный, белый виноградный), компоты, морсы, слабый чай, отвар шиповника.

Подготовка тары

Некоторые лаборатории выдают тару для анализа, включая их стоимость в общую цену. Это лучший вариант. Емкость для кала можно приобрести в аптеке, стоимость несколько рублей. Контейнер продается в стерильном состоянии, его нельзя открывать, протирать или промывать. К крышке прикреплена пластиковая ложечка, которой материал набирается.

В самом крайнем случае можно воспользоваться стеклянной банкой с хорошо подогнанной крышкой (из-под детского питания). Банку нужно хорошо вымыть, а затем прокипятить вместе с крышкой и ложкой или другим предметом, которым будет набираться кал. Если на посуде останутся бактерии, анализ окажется неверным.

Сбор материала

Собирать материал из унитаза или памперса нельзя. Унитаз нужно накрыть чистым полиэтиленовым пакетом, а вместо памперса (ребенку или лежачему больному) подстелить клеенку. Допускается забор материала из чистого горшка.

Контейнер заполняется не более чем на одну треть, плотно закрыть крышкой. К посуде прикрепить направление или написать на этикетке (разборчиво) фамилию и имя пациента, год рождения.

Как и сколько можно хранить материал?

Контейнер с материалом доставляется в лабораторию как можно раньше, оптимально в день забора. Если возможности срочной доставки нет, допускается хранение в холодильнике не более 2-х суток при температуре не выше +4 ° С. При необходимости более длительного хранения материал однократно замораживают при температуре -20 ° С.

Методики анализа и расшифровки показателей

Биологический материал можно исследовать разными способами.

Другие способы выявления хеликобактера

При обследовании используют обычно несколько методов, чтобы окончательно убедиться в наличии или отсутствии хеликобактера:

Набор диагностических тестов зависит от оснащенности лечебного учреждения. «Золотым стандартом» считается гистологическое исследование. Однако положительный результат хотя бы двух разных тестов считается достаточным для того, чтобы подтвердить присутствие бактерии.

Что делать при положительном анализе?

Как можно скорее посетить гастроэнтеролога, чтобы выяснить, нужно ли проводить эрадикацию (удаление из организма) бактерии. Это неоднозначный процесс, есть противопоказания, консультация врача необходима.

Любое заболевания имеет причину. И от того, как правильно будет она определена, зависит и будущее здоровье пациента. Помогают в установлении причины гастрита и язвы различные диагностические методы: инструментальные и лабораторные.

Рассмотрим основные способы выявления одной из наиболее распространённой бактерии, способной вызывать желудочно-кишечные проблемы – Н. руlori.

Глазом увидеть такой мельчайший организм длиной всего 2-3 мкм не представляется возможным, как и провести диагностику в домашних условиях.

Пациент может только предположить наличие гастрита по соответствующим симптомам: боли в эпигастрии после еды, тяжесть и дискомфорт в желудке, изжога, отрыжка воздухом или кислым, металлический привкус во рту. Эти признаки повышения кислотности очень часто сопровождают гастриты, ассоциированные с патогенным микробом.

Но достоверно выявить, поселилась ли бактерия в организме или нет, можно лишь в диагностическом отделении амбулаторно-поликлинического звена, стационара или лаборатории.

Существуют специальные методы, позволяющие с высокой достоверностью обнаружить как сам микроб, так и продукты его жизнедеятельности, а также вырабатываемые организмом антитела в ответ на внедрение микроба:

Бактериологический

Обнаружение патогена в мазках с участка внутренней стенки желудка или культивирование микроорганизма на питательных средах.

Серологический

Обнаружение антител в крови, антигенов микробов в кале.

Морфологический

Выявление Н. руlori под микроскопом при покрытии образца исследования специальными красителями.

Молекулярно-генетический

Методы полимеразно-цепной реакции.

Биохимический

Уреазный тест, дыхательный тест.

Все вышеперечисленные методы можно классифицировать на две большие группы:

Инвазивные. Способы диагностики, основанные на проведении эндоскопического исследования – ФГДС, со взятием биоптата. Участок внутренней стенки желудка затем можно подвергнуть цитологическому, культуральному исследованию, провести уреазный тест.
Неинвазивные. Другие способы обнаружения инфекции, при которых ФГДС не проводится.

Анализ на хеликобактер пилори (helicobacter pylori) – что это такое

Врачу, прежде чем проводить исследование и диагностику, имеется ли патогенный микроорганизм в желудке или нет, необходимо взять биологический материал у пациента. Таким материалом может стать:

Небольшой участок слизистой желудочной оболочки.

Кусочек слизистой отщепляется при проведении фиброгастроскопии – производится биопсия специальным прибором прямо во время ФГДС.

Кровь

Анализ крови позволяет обнаружить не саму бактерию, а иммуноглобулины, которые образуются в организме в ответ на инфекцию: IgA, IgG, IgM. Читайте также на хеликобактерную инфекцию.

При проникновении Н.руlori в желудок и активном её размножении, иммунная система запускает каскад реакций, направленных на изгнание вредоносного микроорганизма. Это проявляется в выработке специфических антител, которые связывают микроб и стремятся к нейтрализации её токсинов.

Антитела или иммуноглобулины (IgA, IgG, IgM) в превышающем норму количестве могут появляться спустя несколько недель после заражения, а также высокий их уровень какое-то время сохраняется и после успешной эрадикации – терапии хеликобактериоза.

Если цель диагностики – профилактическое обследование или оценка эффективности лечения, можно применять неинвазивные методы: взять анализ крови, кала, провести дыхательный тест.

Перед проведением инвазивных анализов от пациента требуется подготовка лишь к эндоскопическому обследованию – фиброгастроскопии.

Кровь для исследования берут из вены, особой подготовки от пациента анализ не требует. Желательно сдавать кровь натощак, вечером допустим легкий ужин, не желательно переедать или употреблять жирную пищу.

Перед анализом кала 3 дня следует питаться правильно: не кушать продукты, содержащие большое количество красителей и консервантов, грубоволокнистой пищи, не принимать медицинские препараты, алкоголь.

Перед проведением дыхательного теста также важна подготовка. Нельзя кушать после 22.00 вечера накануне теста и утром. За два дня перед исследованием исключить все повышающие газообразование продукты и жидкости, способные с выдыхаемым воздухом повышать концентрацию СО2: капуста, бобовые, яблоки, сдоба, газировка. Нельзя употреблять спиртное и курить, использовать жевательную резинку.

От того, насколько сознательно отнесется пациент к подготовке к анализам, зависит их качество и результат. А значит последующее лечение и общее самочувствие.

Тест на хеликобактер при ФГДС и гастроскопии

Широкую популярность приобретают экспресс-тесты в диагностике бактерии. Они достаточно информативны, позволяют быстро установить инфицированность Н.руlori в течение нескольких минут после проведения ФГДС. Это экспресс-уреазные тесты.

Они основаны на способности микробного фермента уреазы расщеплять мочевину с выделением аммония. Ионы аммония создают щелочную среду, и способствует смене цвета индикатора экспресс-системы.

В одноразовый экспресс-набор входит:

мочевина
индикатор РН (изначально его цвет жёлтый)
бактериостатический агент

При производится забор участка слизистой. Данный участок помещается на панель экспресс-набора. Если данная слизистая содержит микроб, его фермент уреаза начинает активно расщеплять содержащуюся в тесте мочевину.

Выделяется аммиак, защелачивает среду, индикатор реагирует на его выделение и меняет свой цвет с желтого на малиновый. Оценивается тест от нескольких минут до суток. Малиновое окрашивание будет свидетельствовать о наличии инфекции и положительном тесте.

Если смены окраски индикатора не произошло, или оно появилось спустя сутки – результат считается отрицательным. Патогена в биоптате нет.

ФГДС с биопсией на хеликобактер

Необходимо пройти лицам, которые:

Имеют симптомы патологии желудочно-кишечного тракта: изжогу, тошноту, дискомфорт или боли в эпигастрии, металлический привкус во рту
Имеют тесный контакт с лицами, у которых уже диагностирована данная инфекция, либо среди членов семьи данный диагноз установлен
В анамнезе уже имеют гастрит, эзофагит, язву без установленной этиологии
Прошли курс эрадикационной терапии по поводу данной инфекции для оценки качества лечения
Имеют проблемы кожи неустановленной этиологии, иммунные нарушения
Успешно прошли лечение от Н.руlori с достоверно подтверждёнными лабораторными данными, для профилактики реинфекции 1 раз в год.