Когда и как правильно сдавать анализ кала на хеликобактер? Как проводится ПЦР анализ на Хеликобактер Пилори? Как правильно собрать кал на хеликобактер

Хеликобактер пилори

Полимеразная цепная реакция (ПЦР) позволяет увеличить число копий ДНК бактерий или вирусов в миллионы раз с использованием фермента ДНК-полимеразы. Для диагностики достаточно одной молекулы ДНК. Синтезированное количество ДНК идентифицируют методами иммуноферментного анализа или электрофореза. ПЦР-диагностика позволяет обнаружить возбудителя на самых ранних этапах инфекционного процесса, в любой биологической среде организма, с возможностью количественного определения вирусов или бактерий.

Хеликобактер пилори – спиральные грам-отрицательные бактерии, которые были обнаружены на слизистой оболочке желудка более полувека назад, но они не вызывали особого интереса до начала 1980-х гг., когда был разработан метод культивирования организмов из биопсийного материала слизистой оболочки.

В 1983 г. австралийский врач Барри Маршалл обнаружил, что H. pylori почти всегда присутствует в желудке пациентов, страдающих хроническим гастритом или язвой. Бактерии, сами по себе, язвы желудка или двенадцатиперстной кишки не вызывают, однако, провоцируют воспалительные процессы в желудке и ослабляют естественную защиту слизистой от воздействия кислотной среды желудка; при этом H. pylori стимулирует гиперсекрецию соляной кислоты, воздействуя на механизмы ее регуляции. Если проводимая терапия приводит к снижению кислотности желудка, то язва может затянуться, но после прекращения лечения существует вероятность ее повторного возникновения. Длительные наблюдения показали, что у больных, не получавших лечение против H. pylori, язва рецидивирует через 2 года в 100 %, а у пролеченных пациентов возникает повторно (обычно вследствие реинфекции H. pylori) только в 5-10 %. Источником заражения H. pylori является инфицированный человек, кошки, свиньи, крупный рогатый скот и обезьяны (макака-резус). Чаще заражение происходит через загрязнённую фекалиями воду и пищу (овощи, при поливе которых использовалась загрязненная вода). Объектом передачи инфекционного начала могут быть загрязнённые руки, слюна, капли слюны или мокроты при кашле. Исследования, проведенные медиками из США, показали, что H.pylori можно считать семейной инфекцией, и, если в семье выявлен носитель H.pylori, то вероятность остальных членов семьи оказаться инфицированными составляет 95%. Обнаружение хеликобактера методом ПЦР позволяет значительно быстрее установить диагноз, проводить контроль лечения. Материалом для исследования могут служить желудочные аспираты, кал, слюна.

Обращаем Ваше внимание, что взятие урогенитального мазка, мазка из зева, носа, полости рта - платное.

Диагностика очень важна, она достоверно устанавливает наличие или отсутствие бактерии в организме человека и позволяет определиться с тактикой лечения, если патоген был выявлен. Не менее важно уметь интерпретировать результаты проведённых обследований.

Расшифровка — это заключение, которое выдаёт врач после проведённого обследования, результат проводимых манипуляций.

Если доктор говорит о том, что отрицательные – это означает, что бактерии в организме не обнаружено. Пациент здоров. И наоборот, положительный результат свидетельствует об инфицированности.

Каждый метод исследования имеет свои специфические нормы и пределы, по которым производится оценка наличия патогенного микроорганизма или его отсутствия, некоторые анализы позволяют выявить степень заражённости и стадию активности жизнедеятельности бактерии.

Как разобраться во врачебных заключениях проведённого обследования? Расшифруем результаты каждого метода диагностики Н.руlori.

Норма анализа на хеликобактер пилори

В организме как взрослых, так и детей данной бактерии быть не должно. Поэтому нормой для любого анализа на этот микроб будет отрицательный результат:

Отсутствие самой бактерии при проведении исследования мазков слизистой желудка под микроскопом. Глаз врача диагноста под многократным увеличением не выявляет S-образных микробов cо жгутиками на конце тела.
Не будет окрашивания в малиновый цвет индикатора в тест-системе при проведении уреазного теста. После того, как биоптат слизистой поместят в среду экспресс-набора, ничего не произойдёт: цвет индикатора останется первоначальным (светло-желтым или другим, который заявлен производителем). Это норма. При отсутствии бактерии некому разлагать мочевину, превращая её в аммиак и углекислый газ. Не происходит защелачивание среды, к которой чувствителен индикатор.
Менее 1% меченого изотопа 13С в выдыхаемом воздухе фиксируется при . Это означает, что ферменты хеликобактера не работают и не расщепляют мочевину, выпитую для исследования. А если ферменты не обнаружены, можно сделать вывод об отсутствии и самого микроорганизма.
Нет роста колоний на питательных средах при проведении бактериологического метода. Важным составляющим успеха данного анализа является соблюдение всех режимов выращивания микроба: кислорода в среде должно быть не более 5%, используется специальный кровяной субстрат, поддерживается оптимальная температура. Если на протяжении пяти дней на среде не появились мелкие круглые бактериальные колонии, можно сделать вывод, что микроба в исследуемом биоптате не было.
Отсутствие антител к патогену при проведении иммуноферментного анализа крови или низкий их титр 1:5 и менее. Если титр повышенный – хеликобактер в желудке присутствует. Антитела или иммуноглобулины (IgG, IgM, IgA) — это специфические белки иммунной системы, вырабатываемые с целью защиты от микроба и повышения сопротивляемости организма.

Если анализ на хеликобактер пилори положительный — что это значит

Положительный результат анализа означает наличие инфекции в организме. Исключение составляет положительный результат на титр антител, который может возникать при проведении ИФА крови сразу после эрадикации бактерии.

Вот в чем дело:

Даже если пройдено успешно, и бактерии больше нет в желудке, некоторое время антитела или иммуноглобулины к ней сохраняются и могут давать ложноположительный результат.

Во всех других случаях, положительный анализ означает присутствие микроба в желудке: бессимптомное носительство или болезнь.

Расшифровка цитологического исследования на хеликобактер

Исследование бактерии под микроскопом из мазков желудочной слизистой называется цитологическим. Для визуализации микроба мазки окрашивают специальным красителем, а затем рассматривают их под увеличением.

Если доктор наблюдает в мазках всю бактерию целиком,он дает заключение о положительном результате анализа. Пациент заражён.

+ если видит до 20 микробов в поле зрения
++ до 50 микроорганизмов
+++ более 50 бактерий в мазке

Если врач в цитологическом заключении сделал отметку в один плюс — это означает хеликобактер-слабоположительный результат: бактерия есть, но обсеменённость слизистой желудка не значительная. Три плюса свидетельствуют о значительной активности бактерий, их очень много и процесс воспаления выражен.

Расшифровка уреазного теста

Результаты экспресс-теста на фермент бактерии уреазу тоже основан на количественном принципе. Врач дает положительную оценку при изменении индикаторной окраски, скорость и степень её проявления выражает плюсами: от одного (+) до трёх (+++).

Отсутствие окраски или появление её спустя сутки означает, что пациент не страдает хеликобактериозом. Результаты анализа в норме. Когда уреазы, выделяемой Н.руlori много, она очень быстро расщепляет мочевину и образует аммиак, который защелачивает среду экспресс-панели.

На изменение среды активно реагирует индикатор и становится малиновым. Отсутствие окраски или появление её спустя сутки означает, что пациент не страдает хеликобактериозом. Результаты анализа в норме.

Чем больше в заключении уреазного теста плюсов, тем выше инфицированность:

Хеликобактер 3 плюса

Если окрашивание в малиновый цвет наблюдается в течение нескольких минут часа – врач сделает отметку в три плюса (+++). Это означает значительную инфицированность микробом.

Хеликобактер 2 плюса

Если при проведении уреазного теста, окрашивание в малиновый тест индикаторной полоски происходит в течении 2 часов – это означает, что заражение человека данным патогеном умеренное (два плюса)

Хеликобактер 1 плюс

Изменение цвета индикатора до 24 часов оценивается в один плюс (+), что свидетельствует о незначительном содержании бактерий в слизистом биоптате и расценивается как слабоположительный результат.

Отсутствие окраски или появление её спустя сутки означает, что пациент не страдает хеликобактериозом. Результаты в норме.

АТ к Helicobacter pylori — что это

Антитела или иммуноглобулины – это специфические соединения белковой природы, циркулирующие в крови человека. Они вырабатываются иммунной системой в ответ на проникновение инфекции в организм.

АТ вырабатываются не только в отношении конкретного патогена, но и ко многим другим агентам вирусной и бактериальной природы.

Повышение количества антител – их титра свидетельствует о развивающемся инфекционном процессе. Иммуноглобулины могут также сохраняться какое-то время и после уничтожения бактерии.

Выделяют несколько классов антител:

Helicobacter pylori IgG — количественная расшифровка анализа

Антитела к хеликобактер пилори (anti Helicobacter pylori в англоязычной литературе), относящиеся к классу иммуноглобулинов G появляются в крови не сразу после инфицирования микробом, а спустя 3-4 недели.

Выявляются антитела иммуноферментным анализом при взятии венозной крови. В норме IgG отсутствуют, либо их титр не превышает 1:5. Если этих белковых фракций нет, можно сказать, что инфекция не присутствует в организме.

Высокие титры и большое количество IgG может свидетельствовать о следующих состояниях:

Наличие бактерии в желудке
Состояние после проведения лечения

Даже после полного исчезновения патогена из организма после проведенной терапии, иммуноглобулины долгое время могут циркулировать в крови. Рекомендуется повторный ИФА-анализ с определением АТ проводить спустя месяц после окончания лечения.

Отрицательный тест может давать ложноположительные результаты: титр антител повышается с небольшим опозданием около месяца от момента заражения.

Человек может инфицироваться данным патогеном, но при проведении ИФА титр будет низкий – это может означать, что заражение произошло недавно, сроком до 3 недель.

IgG к хеликобактер пилори — какая норма

Нормы и титры IgG, их количественная характеристика зависит от методик определения и реактивов конкретной лаборатории. Нормой является отсутствие IgG при исследовании крови методом иммуноферментного анализа, либо его титр 1:5 и ниже.

Не стоит ориентироваться в постановке диагноза «хеликобактериоз» лишь на высокие титры антител. Они могут циркулировать в крови некоторое время после излечения, а также «запаздывать» в сроках появления при инвазии патогеном.

Метод ИФА и определение титра антител служит скорее вспомогательным методом, дополняющим более точные: цитологический, уреазный тест.

Хеликобактер пилори титр 1:20 – что это значит

Титр к иммуноглобулинам класса G 1:20 указывает на положительный результат анализа – инфекция в организме есть. Это достаточно высокий показатель. Считается, что цифры от 1:20 и выше указывают на существенную активность воспалительного процесса, который требует лечения.

Уменьшение титра после лечения – хороший прогностический показатель эрадикационной терапии.

Helicobacter pylori IgM и IgA — что это

Иммуноглобулины класса М – это белковые фракции, которые раньше всех реагируют на заражение бактерией, и появляются в крови раньше других.

Положительный анализ на IgM возникает, когда титры данной фракции антител нарастают. Это происходит при инфицировании. IgA в крови обнаруживается, если хеликобактерный процесс достаточно активен и слизистая желудочная оболочка крайне воспалена.

В норме в здоровом организме иммуноглобулины данных классов либо отсутствуют, либо содержаться в несущественных количествах, которые не имеют диагностической значимости.

При разных заболеваниях желудочно-кишечного тракта требуется проходить комплексное обследование. Если выявляют бактерию Хеликобактер пилори в кале, то диагностируют гастрит, язву, дуоденит и другие более серьезные болезни. Собирать регулярно каловые массы на определение количества патогенных микроорганизмов требуется и во время медикаментозной терапии, чтобы была возможность следить за положительной динамикой терапии.

В каких ситуациях назначается?

Сдавать каловые массы на анализ требуется при разных патологических нарушениях в системе пищеварения. Бактерии Хеликобактер пилори определяют несколькими методиками, каждая из которых применяется при различных нарушениях. ПЦР анализ кала на антиген нужно сдавать в таких случаях:

язвенная болезнь желудка;
образование эрозий в 12-персной кишке и других органах ЖКТ;
атрофический процесс в слизистой оболочке;
полипы и новообразования;
гастроэзофагеальный рефлюкс, характеризующийся забросом желудочного содержимого в пищевод;
генетическая предрасположенность к разным патологиям органов брюшной полости.

ПЦР-исследование кала - самый точный метод контроля состояния микрофлоры желудка при лечении антибактериальными препаратами.
Патогенная микрофлора провоцирует нарушение стула.
Также можно сдать иммунологический тест, проводимый в таких случаях:
нарушенный стул, изжога, чувство дискомфорта и другие патологические проявление дисфункции пищеварительного тракта;
перед проведением курса приема антибиотиков;
железодефицитная анемия либо тромбоцитопения неопределенного происхождения;
генетический фактор;
наличие инфекции у ближайшего окружения.

Подготовка: что надо знать?
Антигенный анализ кала на наличие H. Pylori может дать ложные результаты, если не придерживаются следующие рекомендации:
За несколько суток до проведения лабораторной манипуляции отказываются от приема антибактериальных и слабительных медпрепаратов. Если терапию прекратить невозможно, то о ней предупреждают доктора.
Собрать материал для обследования необходимо в предварительно помытую тару, лучше использовать стерилизованную емкость, которую приобретают в аптеке. Категорически запрещено для анализа на Хеликобактер пилори использовать кал после клизмы или применения препаратов со слабительным действием. В таких случаях достоверность результатов низкая.
Собранный материал доставляют в лабораторию не позже, чем через 12 часов после забора. Если сразу же не удалось сдать анализ на диагностику, то материал хранится на протяжении суток при температуре 2-8 градуса.
Повторный анализ кала на Хеликобактер пилори сдается спустя месяц после проведения антибактериальной терапии.

Особенности проведения

ПЦР - основной молекулярный способ диагностики

Молекулярно-генетическая диагностика выявит наличие фрагментов ДНК бактерии.
Исследование каловых масс на полимеразную цепную реакцию позволяет выявиться ДНК и РНК бактерии Хеликобактер пилори. Методика относится к молекулярной биологии, вследствие которой фрагменты ДНК патогенного микроорганизма увеличивают в многократном размере. Проводят анализ кала на ПЦР при помощи таких средств:
Праймер. Помогает обнаружить и обозначить необходимый фрагмент.
Полимераза. Фермент, который копирует зафиксированный участок цепочки ДНК.
DNTP. Химические вещества, необходимые для выстраивания новой цепи.
Образец для анализа.
Буферный раствор. Посредством жидкости создается максимально приближенной условие для полимеразной цепной реакции.

Методом ПЦР удается накопить специфические участки ДНК в геометрической прогрессии, вследствие процедуры получается из 1-й молекулы больше 100 млн таких же. При помощи такого лабораторного способа исследования кала возможно определить присутствие Хеликобактер пилори даже в небольшом объеме. Если цепь при диагностике не образуется, значит результат теста негативный.
Преимуществом метода ПЦР является автоматизированность, при котором человек принимает минимальное участие в обследовании.

Культуральная методика

Суть анализа в создании питательной среды для жизнедеятельности бактерии.
Хеликобактер пилори может быть обнаружен посредством бактериологического посева кала. Способ диагностики относится к микробиологическим методам. Полученный материал помещают в особую среду, которая является благоприятной для размножения бактерии. Через определенный временной промежуток изучают выросшую культуру при помощи микроскопа. При лабораторном исследовании применяется окрашивание и другие способы, помогающие верно идентифицировать колонию. Помимо этого, выполняется тест на чувствительность к антибиотикам, благодаря чему проще подобрать лечение против Хеликобактер пилори.

Исследование используется для определения антигенов H. pylori в образцах кала методом иммунохроматографии с целью диагностики инфекции H. pylori.

Тест рекомендован многочисленными международными консенсусами, высокоинформативный метод, является ”золотым стандартом” в диагностике хеликобактериоза, используется для первичной диагностики и для контроля за проведенной антихеликобактерной терапией.

Одним из самых перспективных неинвазивных методов подтверждения хеликобактерной инфекции (являющейся в т.ч. фактором риска различных онкозаболеваний желудочно-кишечного тракта и др.) считается определение антигенов возбудителя в кале. Метод высокочувствительный и специфичный (около 90 %), малоинвазивен, прост в применении. Применение теста особенно удобно в педиатрии.

Преимущества метода:

1. Неинвазивный метод (диагностика без использования фиброгастроскопии).

2. Детекция как активных, так и кокковых форм бактерии.

3. Высокая точность, чувствительность и специфичность (до 95-98%).

4. Длительное хранение образцов без потери информативности, а так же возможность транспортировки.

5. Метод рекомендован 3-я международными (Маастрихтскими) соглашениями по диагностики и лечению хеликобактериоза, российской гастроэнтерологической ассоциацией и российской группой по изучению Helicobacter pylori как наиболее точный и удобный для пациента.

6. Используется у взрослых и детей.

7. Не требуется предварительной подготовки.

Бактерии вида Helicobаcter pylori являются причиной возникновения большинства гастритов, до 80% случаев язвенной болезни желудка и до 90% язвенной болезни двенадцатиперстной кишки. Считается, что во всем мире инфицировано более половины населения, а в России - более 80% жителей.

Хеликобактериоз – это широко распространенное инфекционное заболевание с оральным, фекально-оральным и контактным путем передачи возбудителя, сопровождающееся преимущественным поражением антрального отдела желудка, двенадцатиперстной кишки. Источником инфекции является больной человек или бактерионоситель, а наиболее чувствительны к ней люди с иммунодефицитами. Инкубационный период составляет около семи дней.

Возбудителем инфекции является Helicobacter pylori – спиралевидная грамотрицательная бактерия, способная инфицировать желудок и двенадцатиперстную кишку. Helicobacter pylori вызывает лишь предрасположенность к гастриту и язвенной болезни, и только при дополнительных факторах – группе крови О(I), наследственной предрасположенности, курении, злоупотреблении алкоголем, приеме ульцерогенных лекарственных препаратов, частых стрессах, неполноценном питании – возникает язвенный дефект.

В настоящее время доказано, что хеликобактерная инфекция повышает риск рака желудка. Более половины населения в мире являются носителями Helicobacter pylori, однако у большинства носителей нет никаких симптомов, и лишь примерно у 15 % из них возникает гастрит или язвенная болезнь.

Правила подготовки к исследованию:

Не требуется предварительной подготовки.