Окраска гематоксилин-эозином - наиболее распространённый метод окрашивания срезов. Этот методпозволяет установить отношения между частями органа, отлично выявляя все клеточные элементы и некоторые неклеточные структуры. Практически во всех случаях независимо от поставленной задачи применяется окраска гематоксилин-эозином. В большинстве случаев для изучения структуры нормального или измененного в результате болезни органа ограничиваются этим методом окраски. В других случаях, когда перед исследователем стоит специальная задача, пользуются особыми методами, окрашивая в то же время параллельно ряд срезов гематоксилин-эозином.

Эта окраска является двойной: гематоксилин - основной краситель - окрашивает ядра клеток, эозин - кислый краситель - красит протоплазму клеток и в меньшей степени - различные неклеточные структуры.

7. Что понимается под термином базофильная окраска гистологических структур?

Окрашивание клеточных и тканевых структур основными красителями.

8. Что понимается под термином оксифильная окраска гистологических структур?

Окрашивание клеточных и тканевых структур кислыми красителями.

9. Электронно-микроскопические методы исследования гистологических препаратов.

Электронно-микроскопическая цитохимия, Электронно-микроскопическая иммуноцитохимия и Электронно-микроскопическая авторадиография

10. Гистохимические методы исследования гистологических препаратов.

а) Гистохимические методы основаны на специфической реакции между химическим реактивом и определённым компонентом препарата. б) Образующийся продукт реакции имеет окраску, отличную от окраски исходного реактива.

1а) РНК	Реакция Браше. 1. Реактив (как отмечалось, - смесь двух красителей: метилового зелёного и пиронина. 2. а) А. Пиронин специфически окрашивает РНК в красный цвет . Б. Поэтому на препарате ядрышки (в составе ядра) и рибосомбогатые участки цитоплазмы имеют красный цвет. б) Другие структуры ядра (помимо ядрышек) - зелёные . 3. Обычно делают и контрольный препарат, который перед окрашиванием обрабатывают рибонуклеазой.
1б) ДНК	Реакция Фёльгена. 1. Основной реактив - фуксинсернистая кислота (реактив Шиффа). 2. ДНК-содержащие структуры окрашиваются в пурпурно-красный цвет .
2. Белки	Используются различные реакции; в том числе: а) с бромфеноловым синим (у белков - тёмно-фиолетовая окраска ); б) со смесью нингидрин-реактив Шиффа (белки приобретают красный цвет ).
3а) Полисахариды	ШИК-реакция. 1. Реактив - Ш ифф-пер и одная к ислота (выделенные буквы и составляют аббревиатуру ШИК ). 2. Периодат способствует образованию в субстрате альдегидной группы, которая взаимодействует с реактивом Шиффа. 3. На препарате ШИК-положительные компоненты (например, гранулы гликогена) имеют тёмно-красный цвет .
3б) Гликозамин- гликаны	Реакция с толуидиновым синим. 1. При взаимодействии толуидинового синего с веществами, содержащими много кислотных групп, наблюдается метахромазия - изменение окраски с синей на фиолетовую и красную. 2. Подобным свойством обладают, в частности, компоненты аморфного вещества соединительной ткани - гликозамингликаны (являющиеся, как известно, гетерополисахаридами с высоким содержанием кислотных радикалов).
4. Нейтральный жир	Реакция с суданом III (о которой уже упоминалось). Капли жира в жировой клетке окрашиваются в яркий оранжево-красный цвет благодаря растворению в них красителя.

Страница 47 из 68

Окрашивание гематоксилин-эозином (фиксация любая)

Этот метод самый распространенный в гистологической практике, так как благодаря удачному сочетанию красителей, относящихся к двум противоположным группам, позволяет получить общее представление о состоянии исследуемых органов и тканей.
Гематоксилин - природный краситель растительного происхождения, растворимый в воде, спирте и глицерине*.

* Последнее обстоятельство является противопоказанием к заключению в глицерин срезов, окрашенных гематоксилином.

В растворе гематоксилин обладает основными свойствами, благодаря чему хорошо выявляет структурные компоненты ядра, которые содержат нуклеиновые кислоты. Однако красящим свойством обладает не сам гематоксилин, а продукт его окисления -гематеин.
Эозин - искусственный краситель, растворимый в воде или спиртах, обладает кислотными свойствами, окрашивает цитоплазму клеток в розовый цвет.
Существуют многочисленные способы приготовления красящих растворов из гематоксилина, но суть их одна - его окисление.
Приводим наиболее распространенные рецепты.
Кислый гематоксилин Эрлиха. В 100 мл 96% спирта растворить 2 г гематоксилина, прибавить 100 мл дистиллированной воды, затем 100 мл чистого глицерина, 3 г калийных квасцов (химически чистых) и 10 мл ледяной уксусной кислоты, взболтать и оставить на свету «созревать» в течение 14 дней, периодически взбалтывая. Для того чтобы обеспечить постоянный доступ воздуха (процесс окисления гематоксилина), следует брать широкогорлый сосуд и накрывать входное отверстие несколькими слоями марли. В процессе «созревания» раствор из светло-красного становится темно-красным. В плотно закрытом сосуде краситель сохраняет свойства длительное время.
Гематоксилин Бемера. В 10 мл 100% спирта растворить 1 г кристаллического гематоксилина и добавить 200 мл 10% водного охлажденного и профильтрованного раствора калийных квасцов. Раствор «созревает» на свету в течение 4-5 дней, после чего им можно пользоваться. Перед употреблением раствор красителя каждый раз фильтруют. Со временем он портится.
Кислый гемалаун Майера. В 1000 мл дистиллированной воды растворить 1 г гематоксилина, добавить 0,2 г йодата натрия (NaIО3), 50 г калийных квасцов (химически чистых) и, непрерывно помешивая, дождаться их полного растворения (при этом жидкость приобретает фиолетово-синюю окраску). Затем добавляют 50 г хлоралгидрата и 1 г кристаллической лимонной кислоты, в результате чего раствор становится фиолетово-красным. В хорошо закрытом сосуде из химически чистого стекла краситель хранится длительное время.
Преимущество данного метода - быстрое окисление гематоксилина йодатом натрия, благодаря чему раствор не требует «созревания» и сразу может употребляться для окрашивания.
Приготовление красящего раствора из гематеина: а) 1г фабричного гематеина растворяют в 50 мл 96% спирта (при слабом подогревании); б) 5 г калийных квасцов (химически чистых) растворяют в 1 л дистиллированной воды. Затем сливают оба раствора, фильтруют и добавляют немного тимола (для консервации). Применяют без «созревания». Раствор хорошо сохраняется в плотно закрытом сосуде.
Приготовление эозина: 0,1 красителя растворяют в 100мл дистиллированной воды.
Перед окрашиванием необходимо подготовить рабочее место, убрать в сторону все лишние предметы, установить микроскоп и освещение к нему, расставить в определенном порядке посуду с соответствующими жидкостями, проверить состояние «батарей» для обезвоживания и просветления препаратов, отфильтровать красящие растворы, подготовить покровные (а если нужно, и предметные) стекла и т. д. Лишь после этого можно приступать к окрашиванию препаратов.
Методика окрашивания. Начинать следует с определения продолжительности, так как она находится в зависимости от способа фиксации, характера и свойств препарата и самих красителей и т. д. Для этого извлекают из дистиллированной воды три стекла со срезами (доведение препаратов до воды - см. предыдущий раздел), удаляют излишки влаги вокруг них (иначе краска растечется по всему стеклу и разбавится водой), кладут в горизонтальном положении и накапывают пипеткой раствор красителя до полного покрытия препарата. Через 2 мин сливают красящий раствор* с одного из стекол и помещают его в дистиллированную воду (для отмывания излишков красителя). Два оставшихся стекла освобождают от гематоксилина через 4-6 мин соответственно. После этого, вытерев тыльную сторону стекла, препарат рассматривают при малом увеличении микроскопа (если нужно, то и при большом, накрыв препарат покровным стеклом). При окраске свободноплавающих срезов с помощью крючочков переносят несколько срезов в краситель, налитый на часовое стекло или в низкий бюкс, а затем через такие же промежутки времени извлекают, промывают в дистиллированной воде, расправляют на чистом предметном стекле и рассматривают в микроскоп.
Возможные варианты результатов: а) ядра окрашены в светло-фиолетовый цвет без четкого различия микроструктур - препарат недокраш е н; б) ядра темно-фиолетовые (почти черные, но с красноватым оттенком), структурные элементы расплывчаты, цитоплазма тоже окрашена - препарат перекрашен; в) ядра красно-фиолетовые с отчетливо выраженными ядрышком и хроматином, цитоплазма светлая, неокрашена - окраска нормальная.

* Краситель сливают в сосуд, откуда его брали, так как он пригоден к дальнейшему употреблению.

Установив оптимальное время окрашивания гематоксилином, в течение 3-5 мин отмывают излишки красителя в дистиллированной воде и затем помещают препараты в водопроводную воду, где они находятся до приобретения синей окраски (10-14 мин) вследствие посинения ядер в слабощелочной среде (водопроводную воду можно заменить дистиллированной, слегка подщелочив ее аммиаком). После этого препарат вновь помещают на 3-5 мин в дистиллированную воду.
Помимо изложенного выше прогрессивного метода окраски ядер гематоксилином, существует регрессивный метод. Срез с перекрашенными ядрами после промывания в дистиллированной воде помещают на 1-6 с в подкисленный 70° спирт (5-7 капель крепкой хлористоводородной кислоты на 100 мл спирта) и под контролем микроскопа следят за ослаблением окраски (ослабевает фиолетовый и усиливается красноватый тон ядер). Дальнейшая обработка обычная.
Окраску ядер гематеином и кислым гемалауном Майера производят таким же способом, но необходимо особенно тщательно промыть препарат, так как неудаленный остаток кислоты может нарушить окраску.
По окончании промывки окрашенного гематоксилином препарата в дистиллированной воде его вновь извлекают, удаляют излишнюю влагу и накапывают раствор эозина. Время окраски также подбирают опытным путем, варьируя экспозицию от 1 до 4-5 мин.
Возможные варианты: а) окрашенная цитоплазма и внеклеточные образования имеют едва заметный розоватый или желтоватый оттенок - препарат недокрашен; б) общий фон интенсивно красного цвета, микроструктуры видны нечетко, граница ядер расплывчата - препарат перекрашен; в) общий фон умеренно розовато-желтого цвета, ядра четко контурируются - окраска удачная.
После того как окрашивание эозином закончено, краситель сливают обратно во флакон (как и гематоксилин, он может употребляться многократно), препарат ополаскивают в дистиллированной воде, проводят через спирты восходящей концентрации, карбол-ксилол, ксилол и заключают в бальзам.
Следует знать, что эозин легко вымывается в воде и спиртах низкой концентрации, поэтому проводить препарат через эти жидкости следует быстро, лишь окунув несколько раз, и только в 96% и 100% спирте можно держать 1-2 мин. Если препарат перекрашен эозином, то излишнюю окраску следует удалить, увеличив время промывания (в дистиллированной воде) и проведения через слабые спирты.
Для усиления красящих свойств эозина применяют подкисление раствора красителя уксусной кислотой (1 капля 3% уксусной кислоты на 100 мл красителя).
Помимо описанного двойного метода обзорной окраски препаратов, применяются и другие.
Существуют красители, окрашивающие ядра в красный цвет (сафранин, квасцовый кармин), а цитоплазму - в зеленый (световой зеленый), оранжевый (оранжевый Г).

Окрашивание железным гематоксилином по Гейденгайну

(фиксация любая, но наилучшие результаты после сулемовых и хромовых фиксаторов)

Железный гематоксилин в отличие от приведенных выше гематоксилиновых растворов окрашивает не только ядра, но и различные цитоплазматические и некоторые межклеточные структуры. Это свойство основано на том, что перед окрашиванием препарат протравливают в растворе железоаммониевых квасцов, которые по-разному воспринимаются различными тканевыми элементами. Последующая обработка протравленных тканей гематоксилиновым раствором приводит к образованию черного железно-гематеинового лака, который в процессе дифференцировки срезов частично уходит из тканей обратно в раствор. Таким образом, по типу окрашивания железный гематоксилин - типичный регрессивный краситель.
Из сказанного следует, что, варьируя время протравливания, окрашивания и дифференцировки, можно получать различный конечный эффект в зависимости от целей исследования (выявить только ядерные структуры или одновременно цитоплазматические и внеклеточные образования).
Приготовление растворов. 1. Раствор железоаммониевых квасцов. Растворить 10 г железоаммониевых квасцов (сульфат аммиака-железа) в 100мл дистиллированной воды. Можно употреблять только светло-фиолетовые кристаллы. Желтые, зеленоватые, беловатые кристаллы применять не следует.

1. Раствор гематоксилина. Растворить 1 г гематоксилина в 10 мл 96% спирта и разбавить дистиллированной водой до 100 мл, отметив уровень жидкости в сосуде, затем оставить для «созревания» на 4-5 нед, обеспечив постоянный доступ света и воздуха (для этого горлышко сосуда надо прикрыть сложенной в несколько слоев марлей и по мере испарения доливать воду до исходного уровня). В процессе созревания раствор меняет светло-коричневую окраску на темно-коричневую. Перед употреблением раствор разбавляют равным количеством дистиллированной воды.

Если нужно обеспечить быстрое приготовление раствора гематоксилина (без созревания), то к раствору, приготовленному по описанному выше рецепту, добавляют 0,1 г йодата натрия (NaIО3), который быстро окисляет гематоксилин в гематеин и делает краситель пригодным к употреблению через 1 ч после приготовления.
Проведение окрашивания. Предварительная обработка. Находящиеся в дистиллированной воде срезы переносят в 2,5% раствор железоаммониевых квасцов (приготовленный путем разбавления дистиллированной водой исходного 10% раствора) и оставляют на 3-12 ч.
Процесс протравливания можно значительно ускорить (до 1-3 мин), поместив сосуд со срезами в термостат при 37°С. По окончании протравливания раствор сохраняют.
Окрашивание. После ополаскивания в дистиллированной воде срезы помещают в разбавленный (вдвое) раствор гематоксилина на 1-36 ч, до полного почернения (лучше перекрасить, чем недокрасить). Как и при протравливании, время окраски можно сократить (до 2-3 ч - 30 мин) путем помещения сосуда с красящимися срезами в термостат при 37°С.
Дифференцировка. Это самый ответственный этап окрашивания. Окрашенные срезы тщательно отмывают в двух-трех порциях дистиллированной воды (7- 10 мин) и помещают в раствор железоаммониевых квасцов, служивший для протравливания. Степень дифференцировки периодически контролируют в микроскоп. Для этого срез ополаскивают в дистиллированной воде и рассматривают при нужном увеличении (вплоть до водной иммерсии, накрыв предварительно покровным стеклом). Если процесс дифференцировки идет быстро, то следует уменьшить концентрацию раствора железоаммониевых квасцов, разбавив его дистиллированной водой.
Получив окраску нужной степени, срезы тщательно промывают в проточной или часто сменяемой водопроводной воде в течение 10-12 мин (недостаточное отмывание дифференцирующей жидкости приводит к обесцвечиванию препаратов), затем ополаскивают в дистиллированной воде, обезвоживают, просветляют и заключают в бальзам.

Быстрый метод окрашивания железным гематоксилином по Гурвичу

В случае необходимости срочного окрашивания срезов железным гематоксилином Гейденгайна применяют у скоренный метод Гурвича (реактивы те же).
Вынув стекло со срезами из дистиллированной воды, промокают срез гладкой фильтровальной бумагой и покрывают 2,5% раствором железоаммониевых квасцов. Затем тыльную сторону стекла подогревают над спиртовкой до образования пара (не перегревать!) и, дав немного остыть, повторяют процедуру нагревания еще 2-3 раза. После этого сливают квасцы, не промывая срез, накапывают гематоксилин и вновь подогревают до появления паров. Окраску ведут до тех пор, пока срез не приобретает сине-черный цвет. Затем его промывают в дистиллированной воде, заливают квасцами и следят за ходом дифференцировки в микроскоп. По окончании дифференцировки срез тщательно отмывают от квасцов (в двух-трех сменах дистиллированной воды, а затем в проточной), обезвоживают, просветляют и заключают в бальзам. При работе со свободноплавающими срезами рекомендуется предварительно наклеить их на предметное стекло сразу же по извлечении из воды и вести окраску, как описано. Обработка срезов в свободноплавающем состоянии может дать неравномерную окраску.
Общие замечания. Приведенное выше описание протравливания, окраски и дифференцировки зависит от многих факторов (качество реактивов, свойство изучаемого объекта, цели и задачи исследования и т. д.) и устанавливается опытным путем в каждом конкретном случае. Наиболее ответственным этапом окрашивания является дифференцировка, так как отдельные структурные компоненты клеток и тканей с различной скоростью отдают обратно накопленный краситель. Быстрее всех обесцвечивается гомогенная часть цитоплазмы, затем ее гранулярные компоненты и в последнюю очередь структурные элементы ядра.
При работе с целлоидиновыми срезами следует предварительно освободить препарат от целлоидина (см. соответствующий раздел), так как он значительно подкрашивается железным гематоксилином и не обесцвечивается при дифференцировке. Растворение целлоидина следует производить до протравливания в железоаммониевых квасцах, так как после него растворимость значительно ухудшается.

Этикетирование предметных стекол

После наклейки срезов (или непосредственно перед ней) на предметное стекло необходимо нанести соответствующие обозначения. Особенно это важно при серийных срезах и при обработке экспериментального материала. Конкретное содержание пометок зависит от характера исследования и от установок, принятых в той или иной лаборатории. Наиболее надежный способ - выцарапывание знаков специальными карандашами с наконечниками из твердых сплавов типа «победит». Менее надежны надписи тушью. Существуют различные приемы, чтобы тушь при обработке в жидких средах не смывалась и не размазывалась: а) до наклеивания срезов один из концов предметного стекла, смазанный белком с глицерином, нагревают над огнем до появления дыма, после охлаждения наносят на данный участок необходимые обозначения и снова прогревают над пламенем; б) наносят соответствующую надпись, а затем опускают эту часть стекла в 1-2% раствор целлоидина для образования защитной пленки и т. д.

Методика заливки в желатин.

Метод пригоден для эмбриологических. исследований, заливки рыхлых тканей и органов (не вызывает сморщивания), при исследованиях с целью выявления жиров и ли­поидов. Режут желатиновый блок только на замораживающем микротоме.

Для заливки приготавливают два раствора:

а) 25% раствор: 25 г размельченной или порошкообразной желатины растворяют в водяной бане (при 37°) в 75 мл 1 % карболовой воды (во избежание испарения сосуд должен быть закрыт);

б) 12,5% раствор: 1 часть густого раствора разбавляют 1 частью теплой 1% карболовой воды. Для приготовления последней в 100 мл дистиллированной воды рас­творяют 1 г карболовой кислоты при постоянном взбалтывании.

Приготовленные растворы желатины разливают в от­дельные пробирки или другие небольшие сосуды порциями,

Для его приготовления 2,0 г гематоксилина растворяют в 100 мл 96% спирта и к полученному раствору добавляют 100 мл дистиллированной воды, 100 мл глицерина, 3,0 г калийных квасцов и 10 мл ледяной уксусной кислоты. Все ингредиенты нужно добавлять в указанной последовательности. Полученный раствор необходимо поставить на свету и при доступе воздуха не менее чем на 15 дней с тем, чтобы гематоксилин успел окислиться в гематеин, который и является красящим веществом. Банку с раствором при этом накрывают бумажным колпачком или сложенной в несколько раз марлей. Гематоксилин Эрлиха окрашивает ядра в синий цвет. Для окраски цитоплазмы используют 1% водный раствор эозина.

Эта методика наиболее часто применяется и поэтому должна быть описана более детально. Этим методом можно окрашивать целлоидиновые срезы, депарафинированные, парафиновые или замороженные срезы. Замороженные срезы перед окрашиванием следует обезжирить, поместив их на 20-30 мин или на ночь в 96% спирт. Далее срезы переносят в дистиллированную воду. Целлоидиновые срезы переносят из одного бюкса в другой с помощью препаровальной иглы с загнутым концом. Депарафинированные и замороженные срезы можно окрашивать на предметном стекле, наливая или сливая соответствующие растворы. Растворы красителей при этом можно сливать обратно для повторного использования.

Порядок окрашивания срезов гематоксилин-эозином следующий :

1) срезы переносят в дистиллированную воду;

2) окрашивают гематоксилином Эрлиха 2-5 мин;

3) промывают в дистиллированной воде;

4) затем промывают в водопроводной воде 3-5 мин;

5) осуществляют контроль под микроскопом;

6) дифференцируют 1% раствором хлористоводородной кислоты в 70° спирте 1-2 с;

7) быстро переносят срезы в водопроводную воду на 30 мин при частой смене; в водопроводной воде вишневая окраска ядер сменяется синей;

8) осуществляют контроль под микроскопом; если хроматин и ядрышко видны недостаточно четко, то дифференцировку следует повторить (срезы можно смотреть под большим увеличением, накрыв их покровным стеклом);

9) промывают в дистиллированной воде;

10) 1% водный раствор эозина 0,5-1 мин;

11) промывают в дистиллированной воде (и дифференцируют, так как вода смывает эозин); время промывки контролируют по цвету среза;

12) проводят обезвоживание, осветляют в ксилоле, заключают в бальзам. В спиртах эозин также отмывается, так что проводить срезы по спиртам следует быстро. Время окрашивания в гематоксилине нужно установить на первых 2-3 срезах и затем все срезы данного блока окрашивать одинаково. Дифференцировку в растворе хлористоводородной кислоты в спирте можно не проводить, но в этом случае структуры ядра будут менее четкими и в цитоплазме может быть синеватый фон.

Эта окраска является двойной: гематоксилин - основной краситель - окрашивает ядра клеток, эозин - кислый краситель - красит протоплазму клеток и в меньшей степени - различные неклеточные структуры.

Окраска включает использование основного красителя гематоксилина , окрашивающего базофильные клеточные структуры ярко-синим цветом, и спиртового кислого красителяэозина Y , окрашивающего эозинофильные структуры клетки красно-розовым цветом. Базофильные структуры, как правило, это те, которые содержатнуклеиновые кислоты (ДНК иРНК ):клеточное ядро ,рибосомы и РНК-богатые участкицитоплазмы . Эозинофильные структуры содержат внутри- и внеклеточныебелки , например,тельца Леви . Цитоплазма является эозинофильной средой.Эритроциты всегда прокрашиваются ярко-красным цветом.

2. Окраска железным гематоксилином

Краситель для микроскопических препаратов. Обеспечивает визуализацию ядер клеток в срезах (парафиновых, криостатных, вибрoтомных, изготовленных на заморажи-вающем микротоме) и цитологических препаратах. Реагент не содержит этанола и метанола. Предназначен для использования в качестве ядерного красителя при окраске соединительной ткани по Ван-Гизону, Маллори, Массону и в других многоцветных методах окраски гистологических препаратов. Достоинствами предлагаемого гематоксилина являются отличное и интенсивное окрашивание ядер клеток в срезах, устойчивость окраски к пикриновой Кислоте и другим слабым кислотам, отсутствие тенденции к перекраске препарата(при соблюдении рекомендаций) и необходимости дифференцировки окраски.

3. Окраска метиленовым синим Лефлера Методика окраски. Смешивают 30 мл насыщенного спиртового раствора метиленового синего со 100 мл 0,01 % раствора гидроксида калия. Мазки окрашивают в течение 3 - 5 мин, ополаскивают в проточной воде, дифференцируют 3 сек в 0,5 % растворе уксусной кислоты и ополаскивают в проточной воде. Проводят через спирты, просветляют в ксилоле и заключают в бальзам. Препараты можно изучать при масляной иммерсии без заключения в бальзам, но в этом случае они хранятся недолго. Результат: бактерии окрашиваются в густо-синий цвет.

Органический основной тиазиновый краситель , применяют для окраскихлопка ,шерсти ,шелка в ярко-голубой цвет, однако окраска слабоустойчива на свету. Ваналитической химии применяется для определенияхлоратов ,перхлоратов ,катионов ртути ,олова ,магния ,кальция ,кобальта ,кадмия .

В медицине используется в качествеантисептика ,антидот при отравлениицианидами ,угарным газом исероводородом . Имеются сообщения о высокой эффективности этого соединения при леченииболезни Альцгеймера .

4. Окраска пикрофуксином

При окраске пикрофуксином набухшие коллагеновые пучки ярко-красного цвета, гомогенные с плохо различимым волокнистым строением. В очагах более резкого поражения коллагеновые пучки неравномерной окраски, местами они ярко-красные, местами с пятнами желтого цвета, местами коричневые. 5. Окраска по Романовскому-Гимзе Приготовление красителя Готовый жидкий краситель перед окрашиванием мазков разводят из расчета 1-2 капли красителя на 1 мл дистиллированной воды. Мазки окрашивают 20 - 25 минут при 370 C во влажной камере (закрытая чашка Петри с увлажнённым фильтром на дне). После окрашивания мазки промывают в проточной воде, сушат на воздухе и исследуют при масляной иммерсии. Красящую смесь Романовского-Гимзы в виде порошка (коммерческий краситель) растворяют в смеси равных объемов метилового спирта и глицерина (800 мг красителя на 100 мл растворителя). Краситель растворяется плохо, поэтому лучше его растереть с растворителем в количестве 300 мг на 100 мл, а затем, помешивая, добавлять краситель до получения нужной концентрации. Приготовление красителя часто занимает несколько дней. Важно в качестве растворителей использовать химически чистый метиловый спирт и глицерин, так как примеси ухудшают свойства красителя. Вместо метилового спирта можно применять 100 % этиловый спирт. Приготовленную красящую смесь хранят в сухом прохладном месте в плотно закрытом сосуде. Методика окраски 1. Мазки, фиксированные в метиловом спирте, окрашивают раствором (1 мл готовой жидкой краски + 2 мл основного буферного раствора + 47 мл дистиллированной воды) в течение 40-120 мин (продолжительность окрашивания подбирают эмпирически). Пользуются фосфатным буфером, но рН буфера зависит от вида мазка: для мазка костного мозга - 5,8 - 6,0, для мазка крови - 6,4 - 6,5, для выявления простейших - 6,8, малярийного плазмодия - 7,0 - 7,2. 2. Ополаскивают в дистиллированной воде, высушивают и исследуют при иммерсии. Результат: бактерии окрашиваются в фиолетово-красный цвет, цитоплазма клеток - в голубой, ядра - в красный.

6. Окрашивание конго-красным

Внешний вид - красно-коричневые кристаллы. плохо растворим в холодной воде. В органических растворителях не растворяется.Данный краситель находит применение в микроскопических исследованиях и используется, в виде спиртового, водного или аммиачного раствора для окрашивания клеточной оболочкигрибов (самостоятельно, либо в сочетании сгенциановым фиолетовым ) . Конго красный широко применяется в гистологии для выявления амилоида . Помимо этого "классического" применения, конго красный используется в десятках других процедур окрашивания в зоологии беспозвоночных, ботанических исследованиях, цитологии человека и животных .

Окраска гематоксилин-эозин (окраска гематоксилином и эозином) является одним из самых распространённых методов гистологии. Широко используется в медицинской диагностики, в частности в онкологии для окраски ткани, полученной при биопсии.

Окраска включает использование основного красителя гематоксилина, окрашивающего базофильные клеточные структуры ярко-синим цветом, и спиртового кислого красителя эозина Y, окрашивающего эозинофильные структуры клетки красно-розовым цветом. Базофильные структуры, как правило, это те, которые содержат нуклеиновые кислоты (ДНК и РНК): клеточное ядро, рибосомы и РНК-богатые участки цитоплазмы. Эозинофильные структуры содержат внутри — и внеклеточные белки, например, тельца Леви. Цитоплазма является эозинофильной средой. Эритроциты всегда прокрашиваются ярко-красным цветом.

Таким образом, терминология базофильная и эозинофильная структура связана с аффинностью к соответствующим красителям и не связана с кислотностью среды.

Некоторые структуры плохо прокрашиваются гематоксилином и эозином (как правило гидрофобные) и требуют иных методов окраски. Например, участки клеток, богатые липидами и миелином остаются неокрашенными: адипоциты, миелиновая оболочка аксонов нейронов, мембрана аппарата Гольджи и др.

Wikimedia Foundation. 2010 .

Смотреть что такое «Окраска гематоксилин-эозин» в других словарях:

Гематоксилин - Общие Систематическое наименование цис (+) 7,​11b ​дигидробенз[b]индено​​пиран ​3,​4,​6a,​9,​10(6H) ​пентол Химическ … Википедия

Эозин Y - Общие Систематическое наименование 2 (2,4,5,7 тетрабромо 6 оксидо 3 окс … Википедия

ОКРАСКА - (микроорганизмов). Мазок на предметном или покровном стекле высушивается на воздухе; высушивание над пламенем не рекомендуется, допускается лишь помещение препарата вблизи пламени. Высушенный препарат фиксируется троекратным проведением через… … Большая медицинская энциклопедия

ВОСПАЛЕНИЕ - ВОСПАЛЕНИЕ. Содержание: Морфология и патологич. физиология В. . .626 Экспериментальное изучение В. 631 Причины В. 632 Характер В. 63 3 Сравнительная патология В. 636 Механизм развития… … Большая медицинская энциклопедия

Кожа - У этого термина существуют и другие значения, см. Кожа (значения). О коже как материале см. Кожевенное производство, Кожаные изделия, Художественная обработка кожи. Кожа наружный покров организма позвоночных, защищающий тело от широкого… … Википедия

ГИСТОЛОГИЧЕСКАЯ ТЕХНИКА

КРАСКИ - КРАСКИ, химич. вещества, обладающие свойством окрашивать другие предметы в свой или другой цвет непосредственно или с помощью другого хим. соединения протравы. Широкое применение К., надо полагать, вызывается инстинктивным стремле нием человека к … Большая медицинская энциклопедия

Окрашивание гематоксилином-эозином

Универсальный русско-английский словарь. Академик. ру. 2011 .

Смотреть что такое «окрашивание гематоксилином-эозином» в других словарях:

Окраска гематоксилином и эозином - Гистологический образец лёгочной ткани человека, окрашенный гематоксилин эозином. Окраска гематоксилином и эозином (окраска гематоксилин эозином) один из самых распространённых методов окраски в гистологии. Широко используется в м … Википедия

Краситель Романовского - сочетает в своем составе эозинат (химически восстановленный эозин) и метиленовый синий, иногда с продуктами окисления последнего азуром А и азуром Б. Краситель Романовского является прототипом ряда других красителей, которые применяют для… … Википедия

Методические подходы и методы исследования в анатомии человека - Иногда приходится слышать о том, что в анатомии уже ничего не осталось для изучения, исследования, якобы все темы исчерпаны, все, что можно было изучать, уже изучено, все вопросы решены. Как будто бы все, что касается строения тела человека,… … Словарь терминов и понятий по анатомии человека

Краситель Романовского - Райта - Краситель Романовского сочетает в своем составе эозинат (химически восстановленный эозина) и метиленовый синий, иногда с продуктами окисления последнего азуром А и азуром Б. Краситель Романовского является прототипом ряда других красителей,… … Википедия

Гистология - (от греч. ἱστός ткань и греч. λόγος знание, слово, наука) раздел биологии, изучающий строение тканей живых организмов. Обычно это делается рассечением тканей на тонкие слои и с помощью микротома. В отличие от анатомии,… … Википедия

КРОВЬ - КРОВЬ, жидкость, заполняющая артерии, вены и капиляры организма и состоящая из прозрачной бледножелтоват. цвета плаз мы и взвешенных в ней форменных элементов: красных кровяных телец, или эритроцитов, белых, или лейкоцитов, и кровяных бляшек, или … Большая медицинская энциклопедия

ГИСТОЛОГИЧЕСКАЯ ТЕХНИКА - ГИСТОЛОГИЧЕСКАЯ ТЕХНИКА. Содержание: Методика гистологич. исследований. 242 Теоретические основы Г. т. 246 Гистохимия. 253 Краски, употребляемые в Г. т. 258 Гистологическая техник а техника изучения… … Большая медицинская энциклопедия

ПЕЧЕНЬ - ПЕЧЕНЬ. Содержание: I. Аштомия печени. 526 II. Гистология печени. 542 III. Нормальная физиология печени. 548 IV. Патологическая физиология печени. 554 V. Патологическая анатомия печени. 565 VІ.… … Большая медицинская энциклопедия

Базофилия - Эту статью следует викифицировать. Пожалуйста, оформите её согласно правилам оформления статей. Базофилия (от др. греч … Википедия

Спермограмма - (от др. греч. σπέρμα семя и γράμμα запись) анализ эякулята (спермы), используемый в медицине для установления фертильности мужчины и выявления возможных заболеваний половой системы. Спермограмму назначают при жалобах супружеской … Википедия

Патологическая анатомия твёрдых тканей зуба - Патологические процессы в твёрдых тканях зуба традиционно подразделяются на две группы кариес и некариозные поражения. Содержание 1 Кариес (caries) 1.1 Этимология термина «кариес» … Википедия

Источники:

//dic. academic. ru/dic. nsf/ruwiki/666219

//universal_ru_en. academic. ru/1793413/%D0%BE%D0%BA%D1%80%D0%B0%D1%88%D0%B8%D0%B2%D0%B0%D0%BD%D0%B8%D0%B5_%D0%B3%D0%B5%D0%BC%D0%B0%D1%82%D0%BE%D0%BA%D1%81%D0%B8%D0%BB%D0%B8%D0%BD%D0%BE%D0%BC-%D1%8D%D0%BE%D0%B7%D0%B8%D0%BD%D0%BE%D0%BC