Проба кумбса при диагностике гемолитической болезни новорожденных. Типы и причины проведения пробы кумбса Анализ проба кумбса

На тарелку или предметное стекло наносятся пипетками (разными!) по 1-й крупной капле сыворотки О(I), А(II), В(III). Заметив время, чистой стеклянной палочкой или чистым углом предметного стекла капли сывороток соединяются с каплями крови. Определение длится 5 минут, покачивая тарелку, затем к каждой смеси капель добавляют по 1-й капле физраствора и оценивают результаты. Лучше, если сыворотка будет 2-х различных серий. Результаты групп крови должны совпадать в обеих сериях сыворотки.

Оценка результатов изогемагглютинации:

изогемагглютинация. При положительной реакции в смеси появляются мельчайшие красные зернышки склеивающихся эритроцитов. Зернышки сливаются в более крупные зерна, а последние в хлопья. Сыворотка почти обесцвечивается;

при отрицательной реакции смесь в течение 5 мин остается равномерно окрашенной в розовый цвет и никаких зернышек не обнаруживается;

при работе с 3-я сыворотками групп О(I), А(II), В(III) возможны 4 комбинации реакций:

если все 3 сыворотки дали отрицательную реакцию, то есть смесь равномерно окрашена в розовый цвет - это О(I) группа крови;
если отрицательную реакцию дала только сыворотка группы А(II), а сыворотки О(I) и В(III) дали положительную реакцию, то есть появились зерна - это А(II) группа крови;
сыворотка группы В(II) дала отрицательную реакцию, а сыворотки группы О(I) и А(II) дали положительную - это В(III) группа крови.

все 3 сыворотки дали положительные реакции - испытуемая кровь АВ(IV) группы. В этом случае проводится исследование с сывороткой АВ(IV) группы.

Обратите внимание! Капли исследуемой крови должны быть в 5-10 раз меньше капель сыворотки.

Ошибки изогемагглютинации.

Невыполнение агглютинации, где она должна быть и наличие агглютинации, где ее быть не должно. Это может быть при слабом титре сыворотки плюс плохая агглютинация эритроцитов.

Наличие агглютинации, где ее быть не должно - это псевдоагглютинация, когда кучки эритроцитов образуют "монетные столбики". Покачивание тарелки или добавление физраствора их разрушают.

Панагглютинация, когда сыворотка склеивает все эритроциты, в то числе и своей группы крови. К 5-й минуте признаки агглютинации исчезают.

Имеется еще так называемая холодовая панагглютинация, когда склеивание эритроцитов происходит из-за низкой температуры воздуха (ниже 15 °С) в помещении.

Во всех этих случаях проводят либо повторную реакцию, либо по стандартным эритроцитам.

Определение резус-принадлежности крови

Для определения резус-принадлежности, т. е. выявления в крови людей наличия или отсутствия антигенов системы резус используют стандартные сыворотки (реагенты) анти-резус, различные по специфичности, т. е. содержащие антитела по отношению к различным антигенам этой системы. Для определения антигена Rh 0 (D) чаще всего применяют сыворотку антирезус с добавлением 10% раствора желатина или используют стандартный реагент анти-резус, приготовленный заранее с 33% раствором полиглюкина. Для получения более точных результатов исследования, а также для выявления антигенов других серологических систем используют пробу Кумбса (она очень чувствительна также при определении совместимости переливаемой крови). Для исследования используют кровь нативную или приготовленную с каким-либо консервантом. В этом случае кровь следует отмывать от консерванта десятикратным объемом изотонического раствора хлорида натрия.При определении резус-принадлежности - Rh 0 (D) следует применять два образца сыворотки или реагента анти-резус двух различных серий и одновременно использовать для контроля стандартные эритроциты, полученные из крови от резус-положительных (Rh +) и резус-отрицательных (Rh -) лиц. При определении других изоантигенов должны соответственно применяться контрольные эритроциты, в которых содержится или отсутствует тот антиген, против которого направлены антитела в стандартной сыворотке.

Неполные тепловые агглютинины являются наиболее частой разновидностью антител, способных вызывать развитие аутоиммунных гемолитических анемий. Эти антитела относятся к IgG, редко - к IgM, IgA.

ПРОБА КУМБСА

Проба Кумбса: введение. Проба Кумбса - метод лабораторной диагностики, основанный на реакции гемагглютинации.

Основной метод диагностики аутоиммунных гемолитических анемий - проба Кумбса. В основе ее лежит способность антител, специфичных к иммуноглобулинам (особенно к IgG) или компонентам комплемента (особенно СЗ), агглютинировать эритроциты, покрытые IgG или СЗ.

Связывание IgG и СЗЬ с эритроцитами наблюдается при аутоиммунной гемолитической анемии и лекарственной иммунной гемолитической анемии. Прямая проба Кумбса. Прямая проба Кумбса применяется для выявления антител или компонентов комплемента, фиксированных на поверхности эритроцитов. Она проводится следующим образом:

Для получения антител к человеческим иммуноглобулинам (антиглобулиновой сыворотки) или комплементу (антикомплементарной сыворотки) животное иммунизируют человеческой сывороткой, иммуноглобулинами или комплементом человека. Полученную от животного сыворотку очищают от антител к другим белкам.

Эритроциты больного отмывают физиологическим раствором для полного удаления сыворотки, которая нейтрализует антитела к иммуноглобулинам и комплементу и может стать причиной ложноотрицательного результата.

Если на поверхности эритроцитов фиксированы антитела или компоненты комплемента, добавление антиглобулиновой или антикомплементарной сыворотки вызывает агглютинацию эритроцитов.

Прямую пробу Кумбса применяют в следующих случаях:

Аутоиммунный гемолиз.

Гемолитическая болезнь новорожденных.

Лекарственная иммунная гемолитическая анемия.

Гемолитические трансфузионные реакции. Непрямая проба Кумбса. Непрямая проба Кумбса позволяет обнаружить антитела к эритроцитам в сыворотке. Для этого сыворотку больного инкубируют с донорскими эритроцитами группы 0, а затем проводят прямую пробу Кумбса.

Непрямую пробу Кумбса применяют в следующих случаях:

Определение индивидуальной совместимости крови донора и реципиента.

Выявление аллоантител, включая антитела, вызывающие гемолитические трансфузионные реакции.

Определение поверхностных эритроцитарных антигенов в медицинской генетике и судебной медицине.

Подтверждение однояйцовости близнецов при трансплантации костного мозга.

Для проведения биологической пробы кровь начинают переливать по возможности быстро (желательно струйно). После переливания 25 мл крови трубка системы пережимается зажимом. Затем делается пауза на 3 мин, во время которой ведется наблюдение за состоянием реципиента. Для постановки биологической пробы кровь по 25 мл вводится трижды. По окончании пробы (после переливания первых 75 мл крови дробными дозами по 25 мл с интервалами 3 мин) система регулируется на необходимую скорость переливания. При переливании больному более одного флакона крови необходимости извлекать иглу из вены. В этом случае из пробирки флакона, в котором кончилась кровь, игла извлекается и вводится в следующий флакон. Трубка системы (резиновая или пластмассовая) пережимается в этот момент зажимом. Если во время переливания крови возникает необходимость внутривенного введения реципиенту какого-либо другого препарата, это осуществляют путем прокалывания резиновой трубки системы. Проколы пластикатовой трубки недопустимы, так как они не спадаются. После каждой гемотрансфузии за больным необходимо наблюдение для выявления и своевременного устранения возможных осложнений, в том числе аллергических реакций. Через 2 часа после окончания гемотрансфузии следует измерить температуру тела. При повышении ее измерение необходимо повторять в последующие 4 часа через каждый час. Не меньшее значение имеет наблюдение за мочеотделением и составом мочи, которое дает возможность установить наличие токсической посттрансфузионной реакции. Наступление олигурии и анурии после переливания крови, наличие в моче форменных элементов крови и белка являются прямым указанием на развитие посттрансфузионного гемолиза.

Coombs test

Прямая проба Кумбса — антиглобулиновый тест (агглютинация в геле, позволяет выявить полные двухвалентные антитела), с помощью которого определяют антитела класса IgG и С3-компонент комплемента на поверхности эритроцитов. Обычно антитела, выявляемые прямой пробой Кумбса, имеют широкую специфичность, не ассоциированную с хорошо установленным антигеном. Положительная прямая проба Кумбса чётко указывает на наличие у больного гемолитической анемии, хотя не все больные с положительным прямым антиглобулиновым тестом страдают этим заболеванием. Приблизительно у 10% больных антитела или компоненты комплемента на мембране эритроцитов не удаётся определить прямой пробой Кумбса (тест отрицательный), но, тем не менее, они страдают аутоиммунной гемолитической анемией. Для уточнения специфичности антител в таких случаях используют тесты с их элюцией. Прямая проба Кумбса, положительная только к комплементу, обычно имеет отношение к холодовым антителам типа IgM. В этом случае антитела IgM не присутствуют на эритроцитах при базальной температуре тела. Однако вследствие того, что антитела IgM активно фиксируют комплемент, и комплемент остаётся на эритроцитах, при данной форме аутоиммунной гемолитической анемии (болезнь холодовых аггютининов) проба Кумбса будет положительна только к комплементу.

Прямая проба Кумбса положительна при аутоиммунной гемолитической анемии, вызываемой тепловыми антителами, аутоиммунной лекарственной анемии (при приёме метилдопа до 20% больных имеют положительную реакцию), лекарственно-адсорбционном типе гемолитической анемии, иммунокомплексном типе гемолитической анемии (проба положительна только по отношению С3), при аутоиммунной гемолитической анемии, вызываемой холодовыми антителами — болезни холодовых агглютининов (проба положительна только по отношению С3). При пароксизмальной холодовой гемоглобинурии прямая проба Кумбса отрицательная.
В остром периоде заболевания, в связи с разрушением эритроцитов, на которых фиксировалось большое количество антител, при гемолитическом кризе, а также при недостаточном количестве антител при хроническом течении болезни может отмечаться отрицательная прямая проба Кумбса.

:

Важным условием обеспечения качества лабораторного исследования крови является взятие материала натощак, в утреннее время (до 12:00).
За 12 часов до исследования следует исключить прием алкоголя, курение, прием пищи, ограничить физическую активность.
Утром в день взятия крови на исследование можно выпить воду.
Исключить прием лекарств; если отменить прием лекарств невозможно, необходимо проинформировать об этом лабораторию.
Взятие материала желательно проводить до проведения любых медицинских диагностических манипуляций.
При оценке уровня гормонов у женщин важно учитывать день менструального цикла, когда наиболее оптимально определять некоторые гормоны. Эту информацию Вы можете получить у лечащего доктора.

Показатель	Характеристика
Анализатор и тест-система	Гелевые карты; DiaMed AG (Швейцария)
Референтные значения	Отрицательный результат / Положительный результат
Интерферирующие факторы. Медикаменты
Возможна положительная проба при приёме следующих медикаментов: ацетаминофен, салициловая кислота, аминопирин, антигистаминные препараты, карбромал, цефалоспорины, хлорпромазин, хлорпропамид, цисплатин, клонидин, дипирон, этосуксимид, фенфлюрамин, фуадин, гидралазин, гидрохлортиазид, ибупрофен, инсулин, изониазид, леводопа, мефенаминовая кислота, мелфалан, метадон, метилдопа, метилсергид, номифензин, пеницилламин, пенициллины, фенацетин, фенилбутазон, пробенецид, прокаинамид, хинидин, хинин, рифампин, стрептомицин, сульфонамиды, производные сульфонилмочевины, тетрациклин, триамтерен, тримеллитовый ангидрид
Показания к назначению
Диагностика иммунной гемолитической анемии, гемолитической болезни новорожденных, лекарственной иммунной гемолитической анемии, гемолитических трансфузионных реакций
Интерпретация результатов
В норме прямая проба Кумбса -- отрицательная. Положительная проба Кумбса при: аутоиммунной гемолитической анемии; гемолитической болезни новорожденных; лекарственной иммунной гемолитической анемии; гемолитических трансфузионных реакциях

Проба Кумбса – это клинический анализ крови, который проводится, чтобы выявить, содержит ли кровь определенные антитела, которые могут быть небезопасны. Эти антитела приклеиваются к эритроцитам и могут вторгнуться в иммунную систему, а также нанести вред другими способами. В медицинской терминологии это исследование также называют антиглобулиновым тестом (АГТ).

Типы проб Кумбса

Существует два типа проб Кумбса – прямой и непрямой.

Прямая проба Кумбса , также известная как прямой (ПАТ), выявляет ауто-антитела, которые прикрепляются к поверхности эритроцитов. Эти антитела иногда производятся в организме вследствие определенных заболеваний или при приеме определенных медикаментов, таких как прокаинамид, метилдопа или хинидин.

Данные антитела опасны, потому что иногда они вызывают анемию, разрушая эритроциты.

Данный тест иногда назначается для диагностики причины желтухи или анемии.

В норме реакция Кумбса отрицательная.

Положительно при:

гемолитической болезни новорожденных;
аутоиммунном гемолизе;
гемолитических трансфузионных реакциях;
лекарственной иммунной гемолитической анемии.

Непрямая проба Кумбса , также известная как , используется для обнаружения антител к эритроцитам, содержащимся в сыворотке крови (сыворотка – это прозрачная желтая жидкость крови, которая остается после того, как выводятся красные кровяные тельца и коагулянт).

Непрямая проба Кумбса применяется при переливании крови для определения того, совпадает ли кровь донора с кровью реципиента. Это называется пробой на совместимость, она помогает предотвратить любую неблагоприятную реакцию на кровь донора. Данный анализ также рекомендован беременным женщинам. Некоторые женщины имеют антитела класса IgG, которые могут проникать через плаценту в кровь плода и нанести вред новорожденному, вызвав гемолитическое заболевание, известное как гемолитическая анемия.

Процедура

Кровь берется посредством шприца из вены, обычно с тыльной стороны ладони или на сгибе локтя. Место прокола пред этим тщательно дезинфицируется, а после взятия анализа крови накладывается чистая марля или вата.

Полученная кровь очищается в лаборатории, при этом отделяются красные кровяные тельца. Образец затем последовательно исследуется с применением различных реагентов сыворотки и Кумбса, который противопоставляется . Если не случается агглютинации (слипания красных кровяных телец), это означает положительный результат.

Однако если тест отрицательный, это означает, что в крови имеются антитела, которые действуют против эритроцитов. Это может указывать на различные заболевания, такие как анемия (как естественная, так и спровоцированная приемом медикаментов), сифилис, или микоплазменная инфекция. После получения результатов лечащий врач назначит соответствующее лечение.

Видео

Средняя цена в вашем регионе: 2645 от 2645 … до 2645

1 лабораторий делают данный анализ в вашем регионе

Описание исследования

Подготовка к исследованию: Кровь берут из вены, а затем получают сыворотку (плазма крови без фибриногена) путем естесственного свертывания или путем осаждения фибриногена. Исследуемый материал: Взятие крови

На поверхности эритроцитов находится большое количество антигенов. В зависимости от вида этих антигенов выделяют группы крови, самые изученные группы - АВО, Rh, Kell, Duffy и многи другие системы. В норме в крови существуют антитела к антигенам другой группы, но при переливании крови, беременности, аутоиммунных заболеваниях и др. обнаруживаются антитела к своим антигенам.Неполные антитела к эритроцитам

Метод

Непрямая реакция Кумбса основана на выявлении агглютинации (слипания) эритроцитов, у которых на поверхности имеются неполные антитела, которая появляется при добавлении антиглобулиновой сыворотки.

На первом этапе в одну пробирку вносят донорские эритроциты (O(I) группа, Rh+) и исследуемую сыворотку. Если неполные антитела к эритроцитам присутствуют в исследуемой сыворотке, то они фиксируются на поверхности донорских эритроцитов.

На втором этапе на стекло наносят донорские эритроциты с антителами (если они были) и стандартную антиглобулиновую сыворотку с антителами к человеческим иммуноглобулинам. Если на первом этапе антитела к эритроцитам зафиксировались на поверхности эритроцитов, то при добавлении стандартной сыворотки эритроциты склеиваются из-за взаимодействие антител.

Референсные значения - норма
(Реакция Кумбса непрямая (антиглобулиновый тест, выявление неполных антиэритроцитарных антител), кровь)

Информация, касающаяся референсных значений показателей, а также сам состав входящих в анализ показателей может несколько отличаться в зависимости от лаборатории!

Норма:

В норме антител к собственным эритроцитам не должно быть, при постановке реакции Кумбса агрегации эритроцитов не происходит.

Показания

Исследование гуморального специфического иммунитета при подозрении на аутоиммунные реакции в организме, резус-конфликт между матерью и плодом, определение совместимости крови донора и реципиента

Повышение значений (положительный результат)

Антитела к эритроцитам обнаруживают при:

1. Аутоиммунных гемолитических анемиях

2. Гемолитической болезни новорожденных

3. Системных заболеваниях соединительной ткани

4. Хроническом активном гепатите и др.

Антиглобулиновый тест, или реакция Кумбса проводится для того, чтобы выявить определенные антитела, которые атакуют красные кровяные клетки (эритроциты).

Антитела это белки, производимые иммунной системой. Как правило, антитела связываются с посторонними веществами, такими как бактерии и вирусы, и уничтожают их.

2. Зачем нужен тест на антитела?

Тест на антитела может проводиться в следующих случаях:

Перед переливанием крови

Вы наверняка знаете, что у человека может быть одна из четырех групп крови. И антиглобулиновый тест можно проводить для определения возможности переливания крови. Если вам делают переливание, кровь донора должна соответствовать вашему типу (иметь одинаковые антигены). Если при переливании антигены отличаются, иммунная система разрушит перелитые клетки. Это может привести к серьезным заболеваниям и даже смерти. Именно поэтому поиск нужного типа крови является столь важным фактором.

Для выявления риска резус-сенсибилизации

Резус это антиген. Его полное название - резус-фактор. Тест Кумбса используется для обнаружения антител к резус-фактору в крови у беременных женщин. Если женщина с отрицательным резус-фактором крови беременна ребенком с положительным резус-фактором (он может передаваться от отца), есть риск наступления резус-сенсибилизации. Резус- сенсибилизация происходит, когда кровь ребенка смешивается с кровью матери во время беременности или родов. Если группа крови матери несовместима с группой крови ребенка, то ее иммунная система может атаковать плод, воспринимая его чужеродным объектом. При этом может развиться тяжелое заболевание, именуемое эритробластозой плода. В редких случаях, если заболевание не лечить, плод или новорожденный могут погибнуть.

Женщине с отрицательным резус-фактором крови могут провести инъекцию анти-Rh- гаммаглобулина (например, RhoGAM), используемого для предотвращения развития Rh- гемолитической болезни.

Для диагностики аутоиммунной гемолитической анемии

Аутоиммунная гемолитическая анемия является редким заболеванием, связанным с образованием антител к собственным антигенам эритроцитов.

3. Типы антиглобулиновой пробы

Существуют два типа антиглобулиновой пробы, или реакции Кумбса: прямой и непрямой.

Прямая реакция Кумбса, или прямой антиглобулиновый тест обнаруживает антитела, связанные с эритроцитами. Он используется для определения анемии. При этой болезни эритроциты разрушаются быстрее, чем производятся.

Непрямая реакция Кумбса, или непрямой антиглобулиновый тест проводится для поиска антител, не связанных с эритроцитами. Для пробы используется сыворотка крови, в которой и находятся антитела. Эта процедура достаточно редкая: в основном ее проводят для определения возможности переливания крови или как этап обследования беременных женщин.

4. Результаты реакции Кумбса

Норма:

Отрицательный результат теста - антитела не обнаружены.

Прямой тест Кумбса . Отрицательный результат прямого антиглобулинового теста означает, что ваша кровь не имеет антител, связанных с эритроцитами.
Непрямой тест Кумбса . Отрицательный результат непрямого антиглобулинового теста означает, что ваша кровь совместима с кровью донора. Для беременной женщины такой результат означает, что ее организм не выработал антитела против резус- положительного типа крови своего ребенка (резус-сенсибилизации не произошло).

Отклонение от нормы:

Прямой тест Кумбса . Положительный результат прямого антиглобулинового теста означает, что ваша кровь имеет антитела, которые борются против эритроцитов. Это может быть вызвано переливанием несовместимой крови или такими заболеваниями, как гемолитическая анемия или гемолитическая болезнь новорожденных (ГБН).
Непрямой тест Кумбса . Положительный результат непрямого антиглобулинового теста означает, что ваша кровь несовместима с кровью донора. У беременной женщины такие результаты означают присутствие антител против положительного резус-фактора крови ребенка (резус-сенсибилизация). Если ребенок имеет положительный резус-фактор крови, мать будет внимательно наблюдаться врачом на протяжении всей беременности.