Вирус паротита микробиология. Эпидемический паротит: возбудитель, патогенез, микробиологическая диагностика, лечение и профилактика. Практические задания, выполняемые на занятии
Вирус эпидемического паротита и вирус кори относятся к семейству Paramixoviridae .
Вирионы имеют сферическую форму диаметром 150–200 нм. В центре вириона расположен нуклеокапсид со спиральным типом симметрии, окруженный внешней оболочкой с шиповидными отростками. Вирусная РНК представлена односпиральной минус-нитью. Нуклеокапсид покрыт матриксным белком.
Вирус эпидемического паротита относится к роду Paramyxovirus . Вирусная инфекция характеризуется преимущественным поражением околоушных слюнных желез.
Антигенная структура:
1) внутренний NP-протеин;
2) поверхностные NH– и F-гликопротеины.
Первоначально возбудитель репродуцируется в эпителии носоглотки, затем проникает в кровоток и в период вирусемии проникает в различные органы: околоушные железы, яички, яичники, поджелудочную, щитовидную железы, головной и другие органы. Также возможна первичная репродукция в эпителии околоушных желез.
Основной путь передачи – воздушно-капельный.
Лабораторная диагностика: выделение вируса из спинномозговой жидкости, слюны и пунктатов желез и культивирование на куриных эмбрионах и культурах клеток фибробластов кур.
Средства специфической лекарственной терапии отсутствуют.
Специфическая профилактика:
1) живая и убитая вакцина;
2) специфический иммуноглобулин.
Вирус кори относится к роду Morbillivirus .
Антигенная структура:
1) гемагглютинин (Н);
2) пептид (F);
3) нуклеокапсидный белок (NP).
Основные пути передачи – воздушно-капельный, реже контактный.
Первоначально вирус размножается в эпителии верхних отделов дыхательных путей и регионарных лимфатических узлах, а затем проникает в кровоток. Вирусемия носит кратковременный характер. Возбудитель гематогенно разносится по всему организму, фиксируясь в ретикулоэндотелиальной системе. Активность иммунных механизмов, направленных на уничтожение инфицированных клеток, приводит к высвобождению вируса и развитию второй волны вирусемии. Тропность возбудителя к эпителиальным клеткам приводит к вторичному инфицированию конъюнктивы, слизистых оболочек дыхательных путей и полости рта. Циркуляция в кровотоке и формирующиеся защитные реакции обуславливают повреждение стенок сосудов, отек тканей и некротические изменения в них.
Лабораторная диагностика:
1) обнаружение многоядерных клеток и антигенов возбудителя в отделяемом носоглотки;
2) выделение вируса на первично-трипсинизированных культурах клеток почек обезьян или эмбриона человека.
Лечение: средства специфической терапии отсутствуют.
Специфическая профилактика:
1) противокоревой иммуноглобулин человека;
2) живая аттенуированная вакцина.
Вирус эпидемического паротита (свинки)
Эпидемический паротит – острое вирусное заболевание, для которого характерно поражение одной или обеих околоушных слюнных желез. Возбудитель был выделен в 1934 г. К. Джонсоном и Р. Гудпасчуром из слюны больного свинкой путем заражения обезьян в проток слюнной железы.
Морфологически вирус сходен с другими парамиксовирусами, обладает гемагглютинирующей, гемолитической, нейраминидазной и симпластообразующей активностью. Геном представлен однонитевой нефрагментированной негативной РНК, м. м. ее 8 МД. В составе вириона 8 белков; суперкапсидные белки HN и F выполняют такие же функции, как и у других парамиксовирусов. Вирус хорошо размножается в амниотической полости 7 – 8-дневных куриных эмбрионов и в культурах клеток, лучше первично-трипсинизированных, с образованием симпластов. Антигенная структура вируса стабильна, никаких серовариантов не описано.
Вирус малоустойчив, разрушается в течение нескольких минут при воздействии жирорастворителей, детергентов, 2 %-ного фенола, 1 %-ного лизола и других дезинфицирующих веществ. Лабораторные животные к вирусу паротита малочувствительны. Лишь у обезьян путем введения им вируса в проток слюнной железы удается воспроизвести сходное с паротитом человека заболевание.
Особенности эпидемиологии. Заболевание встречается повсеместно. Источником инфекции является только больной человек (в том числе с бессимптомной формой болезни). Он заразен в течение всего инкубационного периода и первой недели болезни. Болеют дети 5 – 15 лет (чаще мальчики), однако могут болеть и взрослые.
Особенности патогенеза и клиника. Инкубационный период составляет в среднем 14 – 21 день. Вирус проникает из полости рта по стенонову (околоушному) протоку в околоушную слюнную железу, где и происходит в основном его размножение. Возможно, что первичное размножение вируса происходит в эпителиальных клетках верхних дыхательных путей. Поступая в кровь, вирус может проникнуть в различные органы (яички, яичники, поджелудочную и щитовидную железы, мозг) и вызвать соответствующие осложнения (орхит, менингит, менингоэнцефалит, реже – тиреоидит, полиартрит, нефрит, панкреатит; тяжелые формы орхита могут обусловить последующую половую стерильность). Наиболее типичным проявлением болезни является воспаление и увеличение околоушных и других слюнных желез, сопровождающееся умеренным повышением температуры. Как правило, в неосложненных случаях заболевание заканчивается полным выздоровлением. Очень часто оно протекает бессимптомно.
Постинфекционный иммунитет прочный, длительный, повторных заболеваний почти не бывает. Естественный пассивный иммунитет сохраняется в течение первых шести месяцев жизни ребенка.
Лабораторная диагностика. Применяют вирусологические и серологические методы, используя слюну, мочу, спинномозговую жидкость, пунктат желез. Заражают 7 – 8-дневные куриные эмбрионы или культуры клеток. Вирус идентифицируют с помощью реакций торможения гемагглютинации (гемадсорбции), иммунофлуоресценции, нейтрализации и связывания комплемента. Серологическая диагностика осуществляется на основании нарастания титра антител в парных сыворотках больных с помощью РТГА или РСК.
Специфическая профилактика. По мнению Международной службы по ликвидации заболеваний, эпидемический паротит относится к группе потенциально ликвидируемых болезней. Основным средством для ее ликвидации является создание коллективного иммунитета с помощью живой вакцины, приготовленной из аттенуированного штамма (пассажи на куриных эмбрионах приводят к снижению патогенности вируса для человека). Вакцина вводится подкожно однократно детям на первом году жизни, иммунитет столь же стойкий, как и постинфекционный. К категории потенциально ликвидируемых болезней относятся также краснуха и корь. Поэтому для ликвидации их рекомендуется применение трехвалентной вакцины (против кори, краснухи и паротита).
Парoтит эпидемический. Свинка.
Парoтит эпидемический (свинка ) – oстрая заразная бoлезнь, наблюдающаяся преимущественнo зимoй и ранней веснoй, прoявляется бoлезненнoстью, припухлoстью oднoй или oбеих oкoлoушных слюнных желез. oбычнo oна легкo распoзнается у пациентoв с типичными прoявлениями бoлезни. Ребенoк выглядит как «хoмячoк с oрехoм за щекoй».
Вирус, вызывающий эту бoлезнь oтнoсится к семейству Paramyxoviridae , и наибoлее частo пoражает детей в вoзрасте oт 5 дo 15 лет. Вспышки забoлеваний среди взрoслых также мoгут наблюдаться, oсoбеннo в закрытых кoллективах (например в армейских казармах, oбщежитиях).
Периoд заразительнoсти начинается еще дo видимых симптoмoв пoражения oкoлoушнoй железы и заканчивается с исчезнoвением этих симптoмoв. Инкубациoнный периoд – 2-3 недели. Путь передачи – вoздушнo-капельный, oднакo, в oтдельных случаях наблюдали передачу при непрямoм кoнтакте, хoтя вирус не мoжет сoхраняться дoлгo вне теплoй влажнoй среды oрганизма хoзяина. В 30-40% наблюдается бессимптoмная инфекция с развитием прoчнoгo иммунитета. Лица с инаппарантнoй инфекцией мoгут заражать oкружающих.
Парoтит эпидемический. Патoгенез.
Парoтит
прoникает в oрганизм через рoт, нoсoглoтку и в течение начальнoй бессимтoмнoй фазы свинки прoисхoдит егo активная репликация в эпителии респиратoрнoгo тракта. Вирус прoникает в крoвь (вирусемия) чтo делает вoзмoжным егo oбнаружение в клетках слюннoй железы и других частo пoражаемых oрганах – пoчках, пoджелудoчнoй и щитoвиднoй железах, яичниках, яичках. Вирус также прoникает в центральную нервную систему. Репликация вируса в этих oрганах привoдит к их серьезным пoражениям и развитию oрхита, ooфoрита, энцефалита и панкреатита.
Вoспаление яичек (oрхит) (oбычнo с oднoй стoрoны) наблюдается пoчти в 20% случаев свинки. Если пoражаются oба, результатoм такoй инфекции мoжет стать развитие стерильнoсти. Вирус парoтита является причинoй таких бoлезней, как oднoстoрoнняя глухoта и синдрoм асептическoгo менингита. Прoявлением асептическoгo (не гнoйнoгo) менингита является лихoрадка, гoлoвная бoль, ригиднoсть (пoвышение тoнуса) затылoчных мышц и мышечная слабoсть, oбуслoвленная вoвлечением в вoспалительный прoцесс мягких мoзгoвых oбoлoчек. Схoднoе забoлевание мoгут вызывать и другие вирусы, а также бактерии. Если бoлезнь вызвана вирусoм парoтита, oна не oбязательнo сoпрoвoждается вoспалением oкoлoушнoй железы, мoжет быть тoлькo менингит.
Парoтит эпидемический. Диагнoстика.
Типичные случаи парoтита легкo распoзнаются и не требуют лабoратoрнoгo пoдтверждения. oднакo, в случае вoзникнoвения инфекции с инoй лoкализацией прoцесса, лабoратoрный диагнoз неoбхoдим, ибo пoражение, например, пoджелудoчнoй или щитoвиднoй железы, менингит мoгут быть вызваны иными причинами.
Пoдтверждение диагнoза мoжет быть oсуществленo выделением и идентификацией вируса, или oбнаружением сooтветствующих антител. Для выделения вируса oбычнo исследуемый материал (слюна, спинoмoзгoвая жидкoсть) ввoдят в 7-9 дневные куриные эмбриoны (в амниoтическую пoлoсть). Вирус oбычнo не вызывает видимых изменений в тканях эмбриoна, егo присутствие выявляют в реакции гемагглютинации. Инoгда неoбхoдимo прoвести нескoлькo дoпoлнительных пассажей, прежде чем удается oбнаружить вирус.
Мoжнo выделить вирус путем заражения культур клетoк. В этoм случае вирус oбнаруживают с пoмoщью реакции гемадсoрбции. Инфицирoванные клетки сoдержат на мембране вирусный антиген – гемагглютинин, и, благoдаря этoму, мoгут адсoрбирoвать на пoверхнoсти эритрoциты кур или мoрских свинoк. Вoзмoжнo также oбнаружение вируснoгo генoма с пoмoщью PCR.
Парoтит эпидемический. Иммунитет.
Антитела выявляются с 6 дня забoлевания в реакции тoрмoжения гемагглютинации сo специфическoй сывoрoткoй. Пoсле выздoрoвления у пациентoв мoгут быть антитела и к белку нуклеoкапсида, и к пoверхнoстнoму антигену – гемагглютинину.
Фoрмирoвание пoжизненнoгo пoстинфекциoннoгo иммунитета связанo именнo с пoследним, нo инoгда, несмoтря на наличие иммунитета, их не удается oбнаружить.
Парoтит эпидемический. Прoфилактика.
Прoфилактика oсуществляется с пoмoщью живoй oслабленнoй вакцины. Иммунизацию начинают с 12-15 месячнoгo вoзраста, oбычнo, испoльзуя тривакцину – прoтив кoри, парoтита и краснухи.
Патогенез и иммунитет
Входными воротами инфекции являются верхние дыхательные пути. Первичная репродукция вируса происходит в эпителиальных клетках носоглотки. Затем он поступает в кровь, разносится по организму, фиксируясь в яичках, яичниках, в поджелудочной и щитовидной железах и в мозге. Однако не исключена возможность первичной репродукции вируса в клетках эпителия околоушных желез, в которые он попадает по стеновому протоку, после чего с кровью заносится во внутренние органы. При этом у мальчиков могут возникнуть орхиты, а у детей обоего пола - менингиты и другие осложнения.После заболевания и в период реконвалесценции обнаруживаются комплементсвязывающие и вируснейтрализующие антитела, причем антитела против V-антигена сохраняются дольше, чем против S-антигена. Последние исчезают сразу после выздоровления. Пост-инфекционный иммунитет сохраняется всю жизнь. Дети первых месяцев жизни не восприимчивы к паротиту, поскольку у них имеются материнские антитела, которые сохраняются в течение полугода. Через 3-4 недели после начала заболевания появляется реакция ГЗТ.Профилактика
Применяются в виде моновакцины или ассоциированной с вакциной против кори. Для лечения и поздней профилактики используется иммуноглобулин, однако он не эффективен при орхитах.Эпидемический паротит
Под электронным микроскопом паротитный вирион имеет неправильную куполообразную форму диаметром 150-170 нм. Возбудитель паротита хорошо культивируется в куриных эмбрионах, а также в клетках HeLa и почечного эпителия эмбриона человека. Вирусы имеют выраженные гемаглютинуючи, нейраминидазни и гемолитические свойства. Они неустойчивы к воздействию физических и химических факторов, быстро инактивируются эфиром, трипсином, формалином, ультрафиолетовыми лучами. Резистентные к высушиванию, не теряют инфекционных свойств при 4 ° С в течение 2 мес., При комнатной температуре - 4 дня. При 55 ° С погибают через 20 мин.Вирусологическая диагностика
Для исследования от больного берут слюну, спинномозговую жидкость (при подозрении на менингит, менингоэнцефалит), мочу. Забор материала лучше проводить в первые дни заболевания. Для уничтожения посторонней микрофлоры полученный материал обрабатывают смесью пенициллина и стрептомицина в концентрации 500-1000 ЕД / мл. Сначала его центрифугируют при 1500 об / мин, затем супернатант подлежит повторному центрифугированию при 40000 об / мин в течение 1,5 часа. Для дальнейших исследований используют осадок, предварительно ресуспензований в растворе Хэнкса.Чтобы выделить из него вирус, осадок вводят в амниотическую полость 7-8-дневных куриных эмбрионов. Эмбрионы инкубируют при температуре 35 ° С в течение 6-7 дней. Чтобы доказать наличие вируса в материале, используют РГА с 1% суспензией эритроцитов кур. Можно использовать как изучаемый объект освещенную 20% суспензию амниотический оболочек, поскольку при нескольких пассажах вирусов в алантоисний жидкости их гемаглютинуючий титр растет.Другим методом выделения вирусов заражения культур клеток. Чаще всего используют клетки почек обезьян, эмбриона человека, перевиваемой линии Vero, ВНК-21. Довести наянисть вирусов можно с помощью оценки цитопатического действия, РГА и РГА. Для постановки последней в инфицированной культуре клеток добавляют 0,4% суспензию эритроцитов кур или гвинейских свинок. Систему выдерживают до 5 мин при температуре 18-20 ° С, отмывают свободные эритроциты и наблюдают под микроскопом явление адсорбции последних на поверхности зараженных клеток.Для идентификации возбудителей используют РСК, РТГА, а при использовании культур клеток - РН. Можно использовать с этой целью метод антител, флуоресцують. Как диагностические препараты используют сыворотки иммунизированных животных или людей, переболевших эпидемическим паротитом.Серологическая диагностика
С этой целью исследуют парные сыворотки для обнаружения прироста титра антител против вирусов эпидемического паротита в РТГА, РСК, РН, РГГадс. Как антиген используют стандартный диагностикум из возбудителей или антигены, которые получают из амниотической или алантоиснои жидкости зараженных куриных эмбрионов. Диагностическим считается четырехкратный прирост титра антител во второй сыворотке по сравнению с первой. Как правило, титры антител во второй сыворотке при использовании РТГА достигают 1:320, а при РСК - 1:64.Экспресс-диагностика
Доказать наличие вирусов в слюне, моче или спинномозговой жидкости можно при использовании метода антител, флуоресцують. Чаще используют метод непрямой иммунофлюоресценции.В последнее время в специализированных вирусологических лабораториях используют полимеразной цепной реакции для выявления вирусной нуклеотидной кислоты в исследуемом материале.Вирус эпидемического паротита (свинки)
Эпидемический паротит – острое вирусное заболевание, для которого характерно поражение одной или обеих околоушных слюнных желез. Возбудитель был выделен в 1934 г. К. Джонсоном и Р. Гудпасчуром из слюны больного свинкой путем заражения обезьян в проток слюнной железы.
Морфологически вирус сходен с другими парамиксовирусами, обладает гемагглютинирующей, гемолитической, нейраминидазной и симпластообразующей активностью. Геном представлен однонитевой нефрагментированной негативной РНК, м. м. ее 8 МД. В составе вириона 8 белков; суперкапсидные белки HN и F выполняют такие же функции, как и у других парамиксовирусов. Вирус хорошо размножается в амниотической полости 7 – 8-дневных куриных эмбрионов и в культурах клеток, лучше первично-трипсинизированных, с образованием симпластов. Антигенная структура вируса стабильна, никаких серовариантов не описано.
Вирус малоустойчив, разрушается в течение нескольких минут при воздействии жирорастворителей, детергентов, 2 %-ного фенола, 1 %-ного лизола и других дезинфицирующих веществ. Лабораторные животные к вирусу паротита малочувствительны. Лишь у обезьян путем введения им вируса в проток слюнной железы удается воспроизвести сходное с паротитом человека заболевание.
Особенности эпидемиологии. Заболевание встречается повсеместно. Источником инфекции является только больной человек (в том числе с бессимптомной формой болезни). Он заразен в течение всего инкубационного периода и первой недели болезни. Болеют дети 5 – 15 лет (чаще мальчики), однако могут болеть и взрослые.
Особенности патогенеза и клиника. Инкубационный период составляет в среднем 14 – 21 день. Вирус проникает из полости рта по стенонову (околоушному) протоку в околоушную слюнную железу, где и происходит в основном его размножение. Возможно, что первичное размножение вируса происходит в эпителиальных клетках верхних дыхательных путей. Поступая в кровь, вирус может проникнуть в различные органы (яички, яичники, поджелудочную и щитовидную железы, мозг) и вызвать соответствующие осложнения (орхит, менингит, менингоэнцефалит, реже – тиреоидит, полиартрит, нефрит, панкреатит; тяжелые формы орхита могут обусловить последующую половую стерильность). Наиболее типичным проявлением болезни является воспаление и увеличение околоушных и других слюнных желез, сопровождающееся умеренным повышением температуры. Как правило, в неосложненных случаях заболевание заканчивается полным выздоровлением. Очень часто оно протекает бессимптомно.
Постинфекционный иммунитет прочный, длительный, повторных заболеваний почти не бывает. Естественный пассивный иммунитет сохраняется в течение первых шести месяцев жизни ребенка.
Лабораторная диагностика. Применяют вирусологические и серологические методы, используя слюну, мочу, спинномозговую жидкость, пунктат желез. Заражают 7 – 8-дневные куриные эмбрионы или культуры клеток. Вирус идентифицируют с помощью реакций торможения гемагглютинации (гемадсорбции), иммунофлуоресценции, нейтрализации и связывания комплемента. Серологическая диагностика осуществляется на основании нарастания титра антител в парных сыворотках больных с помощью РТГА или РСК.
Специфическая профилактика. По мнению Международной службы по ликвидации заболеваний, эпидемический паротит относится к группе потенциально ликвидируемых болезней. Основным средством для ее ликвидации является создание коллективного иммунитета с помощью живой вакцины, приготовленной из аттенуированного штамма (пассажи на куриных эмбрионах приводят к снижению патогенности вируса для человека). Вакцина вводится подкожно однократно детям на первом году жизни, иммунитет столь же стойкий, как и постинфекционный. К категории потенциально ликвидируемых болезней относятся также краснуха и корь. Поэтому для ликвидации их рекомендуется применение трехвалентной вакцины (против кори, краснухи и паротита).